[发明专利]PCR-焦磷酸法检测单增李斯特菌的检测引物、试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种PCR-焦磷酸法检测单增李斯特菌的检测引物，其特征在于，包括PCR引物和测序引物：

PCR引物：上游引物F：AGTATACCACGGAGATGCAGTGA；

         下游引物R：GGCAAATCAATGCTGAGTGTT；

测序引物S：AATTTCGAGCCTAACCT。

2.一种PCR-焦磷酸法检测单增李斯特菌的检测试剂盒，包括DNA提取试剂，PCR反应试剂，单链模板制备试剂，焦磷酸测序试剂，PCR引物和测序引物，其特征在于，所述的PCR引物和测序引物为：

PCR引物：上游引物F：AGTATACCACGGAGATGCAGTGA；

         下游引物R：GGCAAATCAATGCTGAGTGTT；

测序引物S：AATTTCGAGCCTAACCT。

3.一种非诊断目的的PCR-焦磷酸法检测单增李斯特菌的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）对样品进行增菌培养，提取增菌液中菌体的基因组DNA作为模板；

（2）使用权利要求1所述的PCR引物进行PCR反应，回收PCR产物，制备单链模版，然后应用权利要求1所述的测序引物对PCR产物进行焦磷酸测序，自测序引物3^/端后的第一个碱基开始测序，测序引物后的21个DNA碱基序列为

ATCCAGGTGCTCTCGTAAAAG时，判断样品中含有单增李斯特菌。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述的PCR反应，其扩增体系50μL，PCR Mix Buffer 25μl，Taq酶5μl，MgCl₂ 1μl，10μM上、下游引物各2μl，DNA模板1μl，去离子水14μl，所述的PCR反应条件为预变性95℃4min；95℃15s，65℃30s,，72℃30s，43个循环；72℃12min。