[发明专利]检测EGFR基因突变位点的试剂盒

权利要求书

1.检测EGFR基因突变位点的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含检测EGFR基因突变位点的ARMS引物对和特异识别所述突变位点的Taqman-MGB探针；所述ARMS引物对的上游引物或下游引物包含EGFR基因突变位点；

所述Taqman-MGB探针特异识别ARMS引物的扩增产物正义链突变位点的Taqman探针，所述探针的3’端结合有小沟结合分子。

2.根据权利要求1所述检测EGFR基因突变位点的试剂盒，其特征在于：所述突变位点为EGFR基因2235-2249位缺失、2236-2250位缺失、2236-2253位缺失、2239-2253位缺失、2240-2257位缺失、2582位突变和2573位突变中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述检测EGFR基因突变位点的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中，检测EGFR基因2235-2249位缺失的引物对由SEQ ID No：6所示的上游引物和SEQ ID No：7所示的下游引物组成，Taqman-MGB探针的核苷酸序列如SEQ ID No：21所示；

检测EGFR基因2236-2250位缺失的引物对由SEQ ID No：8所示的上游引物和SEQ ID No：9所示的下游引物组成， Taqman-MGB探针的核苷酸序列如SEQ ID No：23所示；

检测EGFR基因2236-2253位缺失的引物对由SEQ ID No：10所示的上游引物和SEQ ID No：11所示的下游引物组成， Taqman-MGB探针的核苷酸序列如SEQ ID No：25所示；

检测EGFR基因2239-2253位缺失的引物对由SEQ ID No：12所示的上游引物和SEQ ID No：13所示的下游引物组成， Taqman-MGB探针的核苷酸序列如SEQ ID No：27所示；

检测EGFR基因2240-2257位缺失的引物对由SEQ ID No：14所示的上游引物和SEQ ID No：15所示的下游引物组成， Taqman-MGB探针的核苷酸序列如SEQ ID No：29所示；

检测EGFR基因2582位突变的引物对由SEQ ID No：16所示的上游引物和SEQ ID No：5所示的下游引物组成， Taqman-MGB探针的核苷酸序列如SEQ ID No：33所示；

检测EGFR基因2573位突变的引物对由SEQ ID No：17所示的上游引物和SEQ ID No：4所示的下游引物组成， Taqman-MGB探针的核苷酸序列如SEQ ID No：31所示。

4.根据权利要求1-3任一项所述检测EGFR基因突变位点的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括DNA质量控制位点的检测引物对和识别所得扩增产物的Taqman-MGB探针，所述引物对由SEQ ID No：18所示的上游引物和SEQ ID No：19所示的下游引物组成，所述Taqman-MGB探针的核苷酸序列如SEQ ID No：35所示。

5.根据权利要求4所述所述检测EGFR基因突变位点的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒由PCR 缓冲液、dNTPs、引物对、Taqman-MGB探针、MgCl₂、TaqDNA聚合酶和模板DNA组成，各组分反应时终浓度为：

PCR缓冲液           终浓度0.5～2.5×；

dNTPs                0. 1～0.75mM；

引物对                终浓度分别为150～350nM；

模板DNA             0.01～10ng/μL；

TaqDNA聚合酶        0.01～1.0U/μL；

MgCl₂                         终浓度为1.5～3.5mM；

Taqman-MGB探针      终浓度为50～200nM。