[发明专利]一种生产人源化抗体或抗原结合片段的方法有效
申请号: | 201210292518.8 | 申请日: | 2012-08-16 |
公开(公告)号: | CN103588876B | 公开(公告)日: | 2018-11-09 |
发明(设计)人: | 张剑冰;武术;章方良 | 申请(专利权)人: | 南京传奇生物科技有限公司 |
主分类号: | C07K16/18 | 分类号: | C07K16/18;C12N15/70 |
代理公司: | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人: | 夏平;傅婷婷 |
地址: | 211100 江苏省南京市江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 生产 人源化 抗体 抗原 结合 片段 方法 | ||
1.一种生产人源化抗体或抗原结合片段的方法,包括:
(1)获得非人类生物针对某一抗原的抗体的重链可变区和轻链可变区序列,
(2)将非人源抗体重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列与人胚系抗体的氨基酸序列对比,
(3)分别选择与非人源抗体重链可变区和轻链可变区同源性最高的人胚系抗体氨基酸序列,
(4)构建人胚系抗体重链可变区框架的文库,包含编码多个重链可变区的核酸序列,其中每个重链可变区包含框架1、框架2、框架3和框架4,所述的每一个核酸序列独立地选自同源的人胚系抗体重链可变区的相应框架区和非人源抗体的互补决定区,
(5)构建人胚系抗体轻链可变区框架的文库,包含编码多个轻链可变区的核酸序列,其中每个轻链可变区包含框架1、框架2、框架3和框架4,每一个核酸序列独立地选自同源的人胚系抗体轻链可变区的相应框架区和非人源抗体的互补决定区,
(6)将所述的人胚系抗体重链可变区框架文库和轻链可变区框架文库组装为完整的框架组装文库,
(7)表达所述的框架区组装文库,
(8)通过ELISA方法检测噬菌体与抗原结合能力,或在相似条件下扩增淘筛后噬菌体并开始随后两轮次的筛选;不止一个的人源化抗体重链可变区、轻链可变区从框架区组合库中筛出;在大肠杆菌TG1细胞中扩增从淘筛获得的噬菌体,随后制备噬菌粒,将噬菌粒载体中的Fab片段亚克隆到FASEBA载体中用于随后的表达筛选;经FASEBA系统筛选后,采用亲和力排序来进一步分离对抗原具有高亲和力的抗体;
(9)制备包含人源化重链可变区和轻链可变区的人源化抗体或抗原结合片段。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于至少一个人源化的重链可变区和人源化的轻链可变区在宿主细胞中表达水平> 5mg/L。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法制备的人源化抗体或抗原结合片段。
4.包含权利要求3所述的人源化抗体或抗原结合片段的组合物。
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