[发明专利]一种调控热休克蛋白70表达、数量及活性的方法及其应用

说明书

一、技术领域：

本发明属生物技术领域，具体涉及一种调控热休克蛋白70表达、数量及活性的方法及其应用。

二、背景技术：

中国卫生部的统计资料表明：目前中国每年新生肿瘤患者总数约212.7万人左右，其中，每年有106万左右的恶性肿瘤新生患者；同时，全国约有268.5万左右的肿瘤现有患者，其中恶性肿瘤现有患者148.5万左右。以肺癌的发病率和死亡率为例，美国每年约有16万人死于肺癌，其中75%的患者为非小细胞肺癌（NSCLC）。我国主要城市中，肺癌的发病率已占据各种恶性肿瘤发病率首位。我国每年有近80万人死于肺癌，其中非小细胞肺癌患者约占80-85%（McCracken M等，2007，CACancer J Clin57:190-205）。由于肺癌的发展进程快，早期不易发现，晚期易转移，因此其死亡率很高。现有的治疗方法（如放疗、化疗等）副作用大、存在药物抵抗性，治疗效果有限，因此，寻求新的治疗靶点和新的治疗方法显得十分必要。

细胞凋亡是目前临床上最常用的肿瘤治疗原理，无论是化疗或者放疗都是通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用，但是肿瘤细胞常常会产生对细胞凋亡的抵抗，从而极大地影响细胞凋亡治疗肿瘤的效果。例如，肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）是肿瘤坏死因子（TNF）超家族成员中继TNF，Fas-L之后发现的第3个凋亡分子。TRAIL具有选择性杀伤肿瘤细胞的作用，能诱导多种肿瘤细胞及转化细胞发生凋亡，但对正常组织及细胞无凋亡诱导作用，并且TRAIL在诱导细胞凋亡过程中，具有较TNF、Fas-L所引起的炎症反应明显较少的优势，因此TRAIL已成为新一代的抗肿瘤药物的热点分子（Walczak H等，1999，Nat Med5:157-163），目前TRAIL已作为抗肿瘤药物在美国正在II期临床试验、在中国已经完成III期临床试验，主要用于治疗难治性肿瘤如肺癌等，显示出较好的治疗效果。然而，试验中发现仍有不少病人包括肺癌患者出现对TRAIL的药物抵抗，大大降低了TRAIL的治疗效果，限制了TRAIL的治疗人群，因此，如何克服TRAIL等细胞凋亡诱导剂治疗中的药物耐受成为迫切需要解决的一个问题。

热休克蛋白HSP，除了作为分子伴侣帮助蛋白正确折叠等基本作用外，还以直接或间接的方式参与了细胞凋亡的调节，其作用靶点涉及不同凋亡信号通路的各主要激酶或关键性调控蛋白（Jaattela M，1999，Exp Cell Res248:30-43），从而可能会是引起TRAIL药物耐受的原因之一。已有研究报道，利用HSP90特异性的抑制剂在体外抑制前列腺癌肿瘤细胞内HSP90逆转了前列腺癌细胞对TRAIL的抵抗性（Ma Y等，2006，Mol Cancer Ther5:170-178）。该研究提示：HSP90可能是逆转肿瘤细胞对TRAIL抵抗性的一个调控靶点。目前针对HSP90作为治疗靶点的药物geldanamycin和17-AAG已经进入临床研究，然而，虽然geldanamycin和17-AAG有良好的抗肿瘤活性，但仍具有局限性，主要表现在稳定性及溶解度有限，分子量大，能够被细胞色素P450所代谢，生物利用率低，且geldanamycin具有严重的肝脏毒性，这些都使其临床应用受到了限制。由于HSP家族成员包括HSP110、HSP90、HSP70，中等分子量HSP和小分子量HSP五大家族，因此，其它热休克蛋白，例如HSP27、HSP70，能够作为肿瘤治疗靶点和肿瘤治疗策略和方法吗？

三、发明内容

本发明的目的就是针对TRAIL等细胞凋亡诱导剂治疗过程中存在的药物抵抗难题，探索一种增加肿瘤细胞对TRAIL的敏感性的新方法，开发一种新的、有效的肺癌治疗策略。

为了达到上述目的，本发明提供了一种增加肿瘤组织或细胞对细胞凋亡敏感性的方法，其特征是通过抑制肿瘤组织或细胞内热休克蛋白HSP70的表达来增加肿瘤组织或细胞对细胞凋亡的敏感性。

进一步地，本发明提供了一种调控肿瘤组织或细胞内热休克蛋白HSP70数量及活性的方法，其特征是通过常规的影响细胞内热休克蛋白HSP70数量及活性的方法或手段达到通过抑制肿瘤组织或细胞内热休克蛋白HSP70的数量及活性来增加肿瘤组织或细胞对细胞凋亡的敏感性的目的。例如，通过筛选HSP70转录的抑制剂抑制HSP70mRNA的转录，或者利用RNA干扰技术或者反义RNA技术降低HSP70mRNA的数量、或者利用HSP70蛋白质合成的抑制剂或者通过加速HSP70蛋白质的降解而减少HSP70蛋白质的数量、或者利用HSP70的抑制剂抑制HSP70的功能及活性。