[发明专利]一种抗体偶联物及其方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体偶联物及其方法，尤其涉及一种偶联效率高的抗体偶联物及其方法。

背景技术

目前抗体的偶联技术相对不是很成熟，偶联过程中抗体的偶联效率比较低，偶联的乳胶颗粒大小不合适。主要存在以下弊端：1.偶联条件的描述不够清晰，很难找到合适的偶联条件；2.偶联的方法比较多，很难从中找到合适的偶联方法；3.对乳胶颗粒的活化基团的要求比较宽泛，导致难以找到合适的用于偶联的基团；4.对偶联过程中各种缓冲液的描述不够清晰，导致偶联中各种离子的浓度难以把握；5.对偶联后乳胶的效果评价方法不统一，导致偶联效果的判断缺乏说服力。

现有的技术中，也存在不少缺点：1.偶联效率低下，造成乳胶和抗体的大量浪费，使偶联的成本居高不下；2.偶联效率低下，导致检出的项目浓度范围达不到要求（如CRP、IgG、IgA等项目）；3.偶联的乳胶颗粒大小不合适，导致检测灵敏度达不到要求；4.整体的偶联效果差，不能保证偶联产品的稳定性，可靠性，重复性；5.对偶联后乳胶的效果评价不够方便和快速。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明通过设计一种全新的偶联方法，明确偶联过程中的各个条件，使偶联过程更容易实现，并用一种特殊的方法对偶联后的抗体活性进行评价。

本发明提供了一种抗体偶联物，包括： 

①活化缓冲液：0.05M、pH=5.0-6.0的MES缓冲液；

②反应缓冲液：0.04M、pH=7.0-8.5的磷酸盐缓冲液；

③终止液：0.04M、pH=7.0-8.5的磷酸盐缓冲液和0.04M的Gly； 其中， 0.04M、pH=7.0-8.5的磷酸盐缓冲液是指，在整个所述终止液中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.04M，pH为7.0-8.5；Gly为甘胺酸，占整个所述终止液中浓度为0.04M；

④封闭液：0.04M、pH=7.0-8.5的磷酸盐缓冲液和质量分数为0.01%-1%BSA溶液；其中，磷酸盐缓冲液占整个所述封闭液中浓度为0.04M，pH为7.0-8.5，质量分数为0.01%-1%BSA溶液是指， BSA溶液占整个所述封闭液的质量分数为0.01%-1%；

⑤保存液：0.02M、pH=7.0-7.8的Tris缓冲液；

⑥反应缓冲液： 0.02M，pH=7.0-7.5磷酸盐缓冲液、0.15M的氯化钠和质量分数为0.005%-0.5%的十二烷基苯磺酸钠；0.02M，pH=7.0-7.5磷酸盐缓冲液是指pH为7.0-7.5磷酸盐缓冲液占整个反应缓冲液的浓度为0.02M，氯化钠占整个反应缓冲液的浓度为0.15M，十二烷基苯磺酸钠占整个反应缓冲液质量分数为0.005%-0.5%；

⑦乳胶：带羧基乳胶颗粒。

优选的，所述乳胶的粒径为60-80nm或者120-160nm。

本发明还提供了一种抗体偶联方法，包括以下几个步骤：清洗乳胶、活化乳胶、偶联抗体、终止步骤、封闭步骤，以及，保存步骤。

优选的，所述清洗乳胶步骤包括：

1）将所述乳胶用所述活化缓冲液稀释至10mg/ml，离心后除去上层清液；再用所述活化缓冲液复溶沉淀至10mg/ml；

2）将步骤1得到的溶液于4℃下离心后除去上层清液，再用所述活化缓冲液复溶沉淀至10mg/ml。

优选的，所述活化乳胶步骤包括：

3）将步骤2得到的乳胶中，加入5-15倍于乳胶中羧基摩尔数的NHS和EDC，在室温下剧烈搅拌15-30min；

4）将步骤3得到的溶液于4℃下离心，除去上层清液，用所述活化缓冲液将得到的沉淀复溶；

5）重复步骤4两次后，再在4℃下离心后除去上层清液，备用。

优选的，所述偶联抗体步骤包括：

6）将抗体用所述反应缓冲液稀释至1-6mg/ml；

7）用去离子水复溶步骤5得到的乳胶至浓度为10mg/ml；迅速将乳胶滴加至等体积稀释好的抗体中；

8）将步骤7得到的乳胶和抗体在室温下剧烈搅拌4-6小时。

优选的，所述终止步骤包括：

9）将步骤8得到的产品于4℃离心后，吸出上层清液，并将上清液放置到离心管中；

10）用所述终止液复溶离心后的沉淀，使乳胶的浓度保持10mg/ml；

11）在室温下剧烈搅拌的条件下反应15-30min。

优选的，所述封闭步骤包括：

12）将步骤11得到的产品于4℃离心下后，吸出上层清液；