[发明专利]紫丁香蘑深层发酵的菌丝体提取物的提取方法及其在卷烟中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种烟用微生物香料的复合提取和应用，具体涉及一种紫丁香蘑深层发酵的菌丝体提取物的提取方法及其在卷烟中的应用。

背景技术

紫丁香蘑（Lepista nuda），又称裸口蘑，紫晶蘑，俗称米汤蘑，属担子苗纲(Basidiomycetes)伞菌目口蘑科(Tricholomataceae)香蘑属(Lepista)真菌，其子实体菌柄呈紫丁香色，具有非常浓郁香气，在中国主要分布于吉林、黑龙江、辽宁、湖北、山西、青海、福建等省。紫丁香蘑在欧洲是一种与松茸、牛肝菌齐名的珍稀食药用菌，其中富含多种抗菌抑菌及抗氧化成分，可防止血管硬化，并可用于肾脏病、胆石、糖尿病、肝硬化等疾病的治疗。目前紫丁香蘑主要应用于食用和药用上，对其水提物和醇提物的充分利用还未做深入研究，并且，紫丁香蘑挥发油和提取物在卷烟中作为香料原料的应用尚未见报道。

菌丝体是食用菌的营养器官。相当于绿色植物的根、茎、叶。它生长在基质中，分解基质，吸收营养，能从基质中吸收水分、无机盐和有机养分，以满足其生长发育的需要。菌丝体主要功能是从死亡的有机质中分解、吸收、转运养分，以满足菌丝增殖和子实体生长发育的需要，在食用菌生产中，菌丝体充分生长是获得丰收的物质基础。

长期以来，植物一直是天然烟用香料的主要来源。但由于香料植物的产量受季节、气候、病害等因素的影响较大，以致原料供应不稳定。尤其是近年来，天然香料的需求急剧增大，使得香料植物资源日渐枯竭，其价格也日益高涨，因此，寻找价廉、资源丰富、供应稳定的产香原料成为目前烟用香料开发研究的迫切需求。紫丁香蘑等珍稀食药用菌含有一系列多样性极为丰富的香味化合物，有望成为天然烟用香料的新来源。然而近年来，市场对紫丁香蘑的需求不断增加，野生资源逐渐枯竭，而人工栽培产量小且不稳定，因此在香料行业中的应用并不多见。菌丝体深层发酵（Submerged Fermentation, SmF）技术是一种快速获取担子菌原料的生物技术，其生产周期短，更适合大规模工业生产。从发酵产物中提取烟用香料，不仅产量稳定，而且成本低廉。近年来，欧美等国已从法律上承认发酵生产获得的香料也属于天然香料的范畴，因而这方面的研究受到广泛重视。目前，尚未见将紫丁香蘑深层发酵的菌丝体提取物用于烟用添加剂的报道。

发明内容

针对现有技术的上述不足，本发明要解决的技术问题是提供一种紫丁香蘑深层发酵的菌丝体提取物的提取方法及其在卷烟中的应用。采用液体深层发酵技术获得紫丁香蘑菌丝体，作为提取物的原料来源，再用不同提取方法和处理步骤从紫丁香蘑菌丝体中依次得到提取物及其在卷烟中的应用。

为解决上述技术问题，本发明所设计的一种紫丁香蘑深层发酵的菌丝体提取物的提取方法，该提取方法步骤包括：

1）将紫丁香蘑按体积比5~15%接种于发酵培养基，在温度25~30℃，

通气量为0.8~1.0dm³/min，转速100~150r/min条件下，培养3~5d，进行深层发酵获得紫丁香蘑菌丝体发酵混合物；

2）将步骤1）中紫丁香蘑菌丝体发酵混合物进行水蒸汽蒸馏提取挥发油至完全，得到浅红色透明油状物，

3）将步骤2）中浅红色透明油状物溶解到80~100倍量重量的65~75%乙醇中，得到浅红色透明一级提取物。

4）将步骤2）中浅红色透明油状物过滤，分离得到滤液和滤渣；向滤渣加入5~15倍量重量的水进行回流提取1~3h后过滤，合并两次提取的滤液，浓缩至密度为0.8~1.2g/mL的溶液，搅拌中加入4~6倍量重量90~95%的乙醇，静置3~6h，过滤，得到浅棕色液体二级提取物，其pH值为6.5~7.0；

进一步地，所述步骤1）将紫丁香蘑按体积比5~10%接种于发酵培养基，在温度25~28℃，通气量为0.8~1.0dm³/min，转速100~120r/min条件下，培养3~5d。更优选方案为将紫丁香蘑按体积比8%接种于发酵培养基，在温度26℃，通气量为1.0dm³/min，转速120r/min条件下，培养4d。

再进一步地，所述1）中发酵培养基的配方为：马铃薯200~250g，加入水1000ml，100℃蒸煮20分钟，双层纱布过滤马铃薯蒸煮液，添加5~8g麸皮，食用蔗糖15~30g，硫酸锰1~2.5g，硫酸镁1~2.5g。

上述紫丁香蘑菌丝体提取物在卷烟中的应用，将提取物按照烟丝重量的0.001～0.10%的比例进行加香或者加料。