[发明专利]一种原发性肝细胞性肝癌相关的klotho基因单核苷酸多态性其构建方法及其应用

权利要求书

1.一种检测原发性肝细胞性肝癌相关的klotho基因单核苷酸多态性的方法，其特征在于，采用PCR-RFLP方法，包括以下步骤：

⑴以包含klotho基因的待测人全基因组DNA为模板，PCR扩增得到klotho基因外显子4区的包含rs648202单核苷酸多态的DNA序列，即SEQ ID No.1中第2190位至第2352位所示序列；

其中，PCR引物序列如下：

上游引物为F: 5'- ATAGCCTTGCAGGCTGATTG -3'   

下游引物为R: 5'- TTCTTTGGTTCAGCCAGTCC -3'

⑵ 对PCR扩增产物经限制性内切酶Hae III进行酶切后通过琼脂糖凝胶电泳进行rs648202单核苷酸多态分型。

2.一种分离核酸，其特征在于，具有SEQ ID No.1中第2190位至第2352位所示序列，且在SEQ ID No.1中的第2255位的碱基为T。

3.一种检测原发性肝细胞性肝癌相关的klotho基因单核苷酸多态性的特异性引物，其特征在于，上游引物为F: 5'- ATAGCCTTGCAGGCTGATTG -3' ，下游引物为R: 5'- TTCTTTGGTTCAGCCAGTCC -3'。

4.一种原发性肝细胞肝癌易感性的诊断试剂盒，其特征在于，它包括：

（1）特异性扩增klotho基因单核苷酸多态性rs648202的引物，其中，上游引物为F: 5'- ATAGCCTTGCAGGCTGATTG -3' ，下游引物为R: 5'- TTCTTTGGTTCAGCCAGTCC -3'；

（2）检测扩增产物与正常的klotho基因相比是否存在变化所需的试剂。