[发明专利]一种穿心莲内酯有关物质的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，尤其是一种穿心莲内酯有关物质的测定方法。

背景技术

穿心莲内酯（Andrographolide，AND）别名穿心莲乙素，系自爵床科植物穿心莲中提取得到的二萜内酯类化合物，其结构式如下：

。

穿心莲内酯是穿心莲的重要提取物和有效活性成份，具有清热解毒、凉血消肿等功能。现在已上市的或处于开发阶段的穿心莲内酯制剂主要有穿心莲内酯片、穿心莲内酯胶囊和穿心莲内酯注射剂。穿心莲内酯是以穿心莲叶为原料，采用不同的提取工艺制备得到的制剂原料药。其可用于制备各种穿心莲内酯制剂。穿心莲内酯具有酯类结构，在水溶液中，特别是高温、强碱性环境中，易水解、开环、异构化、树脂化。由于穿心莲内酯本身化学结构的不稳定性，穿心莲内酯原料药及其制剂中除主要成分穿心莲内酯外，往往同时存在新穿心莲内酯（Neoandrographolide ，NAND）、去氧穿心莲内酯（Deoxyandro- grapholide，DAND）和脱水穿心莲内酯（Dehydroandrographolide，DDAND）等二萜内酯类杂质。上述杂质和穿心莲内酯原料及制剂的制备及储运过程中可能引入的其他杂质统称为有关物质。该有关物质会对穿心莲内酯原料药和制剂的安全性和有效性产生一定的影响。因此，准确测定穿心莲内酯原料及其制剂中有关物质的含量，是正确评价穿心莲内酯原料药及其制剂质量的重要指标。

目前检测穿心莲内酯及其制剂中化学成分含量的主要手段是高效液相色谱法，邓贵华，林朝展等人公开了一种穿心莲药材及其制剂中6个内酯类成分的含量分析方法（《药物分析杂志》，2011，31（2）：231~235），采用 Kromasil RP-C₁₈( 4.6mm*250 mm,5μm )色谱柱，乙腈( A)-水( B)二元系统梯度洗脱，洗脱程序如下: 0~10 min，A相为30%; 10~ 20 min，A相升至40%; 20~23 min，A相维持在40 %;  23~40 min，A相升至50%; 40~70 min，A相升至65%，流速1.0mL*min^-1,检测波长226 nm, 柱温 25℃。分别称取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯、新穿心莲内酯对照品适量，加甲醇溶解后，制备成混合对照品溶液；再分别称取穿心莲内酯药材和片剂的粉末，配制成供试品溶液，然后按照外标法测定供试品溶液中上述各成分的含量。

目前，缺少一种操作简便、灵敏、稳定性好的穿心莲内酯有关物质的测定方法，能够快速、准确地测定及评价穿心莲内酯原料、以及相关制剂制备及稳定性试验期间的有关物质含量。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简便、稳定性好的测定穿心莲内酯有关物质的方法，以能够快速、准确地测定穿心莲内酯原料药及其制剂中的有关物质含量。

为实现本发明目的，本发明所采用的技术方案为：

一种穿心莲内酯有关物质的测定方法，步骤如下：

（a）称取穿心莲内酯对照品，加甲醇配制成穿心莲内酯含量为5~15μg/mL的对照品溶液；称取穿心莲内酯原料或穿心莲内酯制剂，加甲醇配制成供试品溶液，所述供试品溶液中穿心莲内酯含量为对照品溶液中穿心莲内酯含量的100倍；

（b）采用HPLC分别测定a步骤中的对照品溶液和供试品溶液，色谱条件如下：选用十八烷基键合硅胶为填料的C18色谱柱，以水为流动相A，乙腈为流动相B，甲醇为流动相C进行梯度洗脱；流速为1 mL/min，检测波长为200~260 nm，柱温为25~40℃，梯度1流动相的体积比为：A:B:C=60~75% : 25~35% : 0~5%，进样15~20min后流动相变化为梯度2；梯度2流动相的体积比为：A:B:C=55~70% : 25~35% : 5~10%，洗脱至无杂质峰出现；

（c）对比b步骤中测得的对照品溶液和供试品溶液的色谱图，供试品溶液中单个杂质峰的面积＜对照品溶液色谱图中穿心莲内酯峰面积的一半，供试品溶液中杂质峰的面积和＜对照品溶液色谱图中穿心莲内酯峰的面积。