[发明专利]一种诱导人多能干细胞分化为视网膜前体细胞的方法

权利要求书

1.一种诱导人多能干细胞分化为视网膜前体细胞的方法，其特征在于，将人胚胎干细胞或人诱导的多能干细胞在含有N2的培养基中诱导后，转入含有神经基础培养基、敲除的血清替代物和烟酰胺的视网膜诱导培养基，获得视网膜前体细胞，其包括步骤：

（1）将人多能干细胞消化后，制成细胞球，第3天更换培养基为神经诱导分化培液；

（2）第7天进行贴壁，第14天更换培养基为视网膜细胞诱导分化培液，得神经管样的细胞结构；

（3）第16天将形成的类神经管样结构吹下来，第17天将大的细胞球吹成稍小的细胞球，形成典型的视杯样细胞球；

（4）第21天获得形态结构典型的视杯样细胞球。

2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）第3天更换培养基为含有1%N2、0.1mM非必需氨基酸和2mM L-谷氨酰氨的神经诱导分化培液。

3.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）第7天贴壁时，用10%胎牛血清促进细胞球贴壁，且使用时间16个小时。

4.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中的视网膜细胞诱导分化培液中，含有Neurobasal培养基、14%血清替代物、5ml非必须氨基酸、2mM L-谷氨酰氨以及10mM烟酰胺。

5.权利要求1的诱导人多能干细胞分化为视网膜前体细胞的方法制得的视网膜前体细胞在制备移植治疗视网膜细胞不可逆性变性疾病药物中的用途。

6.按权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的视网膜细胞不可逆性变性疾病是年龄相关性黄斑变性或视网膜色素变性。

7.权利要求1的诱导人多能干细胞分化为视网膜前体细胞的方法制得的视网膜前体细胞在制备iPS细胞药物筛模型中的用途。