[发明专利]一种井冈霉素各组分的定性与定量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及到一种井冈霉素(Validamycin)相关产品中井冈霉素定量检测的技术领域，更具体涉及一种井冈霉素产品中井冈霉素A及相关组分的定性与定量检测方法.可用于井冈霉素相关产品各组分定性与定量检测及为生产高品质井冈霉素产品提供依据。

背景技术

井冈霉素(Validamycin)是由吸水链球菌井冈变种产生的水溶性抗生素葡萄糖苷类化合物，分子式C₂₀H₃₅O₁₃N，分子量497.51，毒性低，纯品为白色无定型粉末，溶于水、二甲基甲酰胺，微溶于乙醇，不溶于丙酮、苯、乙酸乙酯、等有机溶剂，吸湿性强，在室温PH3-9水溶液中稳定。井冈霉素主要由井冈霉素A（Validamycin A,VA）、井冈霉素B（Validamycin B,VM-B）、井冈霉素C（Validamycin C,VM-C）、井冈霉素D（Validamycin D,VM-D）、井冈霉素E（Validamycin E,VM-E）、井冈霉素F（Validamycin F,VM-F）、井冈霉亚基胺A（ValidoxylamineA，VxA-A）等组分组成。主要用于防治各类纹枯病，对稻曲病也有效，也可用于防治棉花、瓜类立枯病，其有效成分为井冈霉素A（ISWA T,KAMEDAY,ASA IM,studies on validamycins,new antibiotics IV[J].Antibiotics.1971,24(2):119-123）；VxA-A是昆虫的海藻糖酶抑制剂，可开发为生物杀虫剂；井冈胺和井冈霉亚基胺是重要的糖苷霉抑制剂，是合成其他新酶抑制剂类降糖药的重要医药中间体和原药（金利群，井冈霉亚基胺A的制备及其对海澡糖酶的抑制作用[D]。杭州：浙江工业大学，2003.）。井冈霉素在我国已经形成了一个经济效益较高的生物技术产业，以井冈霉素为原料开发附加值更高的医药品和安全性能更高的生物杀虫剂是十分必要的，具有社会和经济双重效益（上海农药研究所农抗组，《井冈霉素》[M]，上海人民出版社，1977）。而获得这些高品质的井冈霉素需要分离或纯化井冈霉素各种组分，因此，采用有效的手段对井冈霉素各组分进行定性和定量分析具有重要意义。目前，国内对井冈霉素的定量分析方法有离子交换比色法、薄层荧光法（徐辉，薄层-荧光法测定井冈霉素水剂，上海农学院报1998，16（2）：148-151.）、液相色谱法（GB/T9553-93），前两者只能测定井冈霉素总含量，不能将各组分分离并定量；GB/T9553-93所用的液相色谱法也只能将井冈霉素A分离并定量。日本在检测井冈霉素产品中的VA、VM-B、VM-C、VM-D、VM-E、VM-F、VxA-A方面也有相关报道，其检验方法采用100%的20mmol/L磷酸缓冲盐作为流动相，该方法虽然基本能分离井冈霉素产品中的不同组分，但是各组分分离效果不够理想。其不足之处表现为：1、系统压力高达200bar以上，随着检测量的增加，压力会不断升高，高浓度高比例的缓冲盐很容易破坏色谱柱结构，导致色谱柱寿命极短；2、分析时间长达1小时，用于大量生产检验不够现实；3、由于时间长，峰形变差，而且随着时间的延长，很容易产生基线飘移，因此会造成定量不准确；4、响应值小，同样的进样浓度与进样量，其峰高与峰面积响应基本是本发明的三分之一。本发明灵敏度高、选择性好，井冈霉素产品中VA、VM-B、VM-C、VM-D、VM-E、VM-F、VxA-A均能达到基线分离；由于流动相中加入了1%（体积比）甲醇作为流动相改性剂，缓冲盐浓度低，因此对系统压力、分析时间、基线飘移、色谱柱的寿命及准确度方面都有很大改善。所以此方法可以用于井冈霉素产品的井冈霉素A及相关组分的定性与定量检测，也可用于井冈霉素A及相关组分的分离、纯化与研究。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种井冈霉素产品中VA及VM-B、VM-C、VM-D、VM-E、VM-F、VxA-A等相关组分的定性与定量检测方法。本发明灵敏度高、选择性好，井冈霉素产品中VA、VM-B、VM-C、VM-D、VM-E、VM-F、VxA-A均能达到基线分离；由于流动相中加入了1%(体积百分数)甲醇作为流动相改性剂，缓冲盐浓度低，因此在系统压力、分析时间、基线飘移、色谱柱的寿命及准确度方面相对日本相关检测方法都有很大的改善。

一种井冈霉素A及六种相关组分的定性与定量检测方法，其步骤是：

A、鉴别试验——定性：