[发明专利]一种冬虫夏草菌中国被毛孢的原生态分离法

权利要求书

1.一种冬虫夏草菌中国被毛孢的原生态分离法，包括以下步骤和条件：

a、种源是来自于中国青海玉树地区的新鲜的正在成熟的冬虫夏草，采集时要保留以子实体周围直径10～12cm、深8～12cm的土壤；培养基来源于冬虫夏草的寄主蝙蝠蛾幼虫的活体，选择白润、健壮的，4～5龄期的、活的蝙蝠蛾幼虫，采集时及时用无菌水漂洗并储放；所述冬虫夏草和冬虫夏草的寄主蝙蝠蛾幼虫的活体在采集后的储存温度为0～4℃，储存时间为0～15天；

b、将种源转接于培养基上进行培养，培养时参数控制在温度6～9℃，pH值6～6.5，光照50～100lux，空气湿度55～60%，氧气含量20%。

2.根据权利要求1所述的冬虫夏草菌中国被毛孢的原生态分离法，其特征为还包括以下步骤和条件：

a、所述种源在采集时应及时用灭过菌的牛皮纸袋套住冬虫夏草子实体部分，将所述种源的子实体正在弹射的子囊孢子进行分离，即当见到牛皮纸上附着有白色、线状子囊孢子时，用无菌剪刀剪取表面线状子囊孢子所在的牛皮纸片，保存于灭过菌的PE盒中备用；

b、将蝙蝠蛾幼虫活体的整条虫浸泡在75度酒精里3分钟，再用无菌水换洗3次；将消毒过的蝙蝠蛾幼虫切去头部、外皮和黑色的肠道，再打浆，用巴马天寿泉天然矿泉水微调pH值至6～6.5，加入1.8～2.2％（wt%）的琼脂，制成试管斜面或平板，凝固作为培养基；

c、培养：用无菌接种环，挑取牛皮纸片上的白色线状子囊孢子，转接于所述培养基试管斜面或平板上，并放入培养箱中培养40～45天。

3.根据权利要求1所述的冬虫夏草菌中国被毛孢的原生态分离法，其特征为还包括以下步骤和条件：

a、将所述种源的虫体部分，首先用9～11℃无菌水清洗掉其表面的膜皮，然后，用浓度0.1％氯化汞对它们进行表面消毒10～15分钟，然后，用无菌水清洗5～7次，保存于灭过菌的试管中；

b、将蝙蝠蛾幼虫活体的整条虫浸泡在75度酒精里3分钟，再用无菌水换洗3次；将消毒过的蝙蝠蛾幼虫切去头部、外皮和黑色的肠道，再打浆，用巴马天寿泉天然矿泉水微调pH值至6～6.5，加入1.8～2.2％（wt%）的琼脂，制成试管斜面或平板，凝固作为培养基；

c、培养：用灭过菌的镊子从试管中取出冬虫夏草，用无菌手术刀从虫体头部切离子实体，再用另一无菌手术刀将虫体部分切成1.5～2.0 mm薄片，转接于培养基试管斜面或平板上，并放入培养箱中培养，设置温度6～9℃，光照50～100lux，空气湿度55～60%，氧气含量20%，培养50～55天。