[发明专利]一种鸡传染性支气管炎抗原抗体复合物及其制备方法

说明书

技术领域

本专利涉及一种鸡传染性支气管炎抗原抗体复合物及其制备方法，属于生物疫苗领域。

背景知识

鸡传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种高度接触传染的疾病，主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统。雏鸡发病后通常表现流鼻液、呼吸困难等呼吸道症状，甚至会发生死亡；此外，该病还可导致蛋鸡产蛋量下降和蛋白品质下降，是目前严重危害世界养禽业的重大传染病之一，给家畜养殖业造成巨大的经济损失。

目前尚无特效疗法，主要采用接种疫苗方式。由于传染性支气管炎病毒血清型复杂且相互之间交叉保护力弱，而且新的血清型和变异株不断出现，如果选择的疫苗不当，不但起不到预防的效果，而且还可能给当地增添新的病毒株。所以用疫苗前必须掌握当地疾病流行的病毒血清型，并使用与当地流行毒株抗原性一致的疫苗品系，这样才能达到有效的免疫预防目的。目前市场上还是主要以弱毒苗为主，虽然有一定的治疗效果，但是，效果还不是很好，针对目前这种状况，研制出一种安全、有效、经济、稳定的疫苗就显得尤为重要。

发明内容

本发明目的在于提供一种鸡传染性支气管炎抗原抗体复合物，该复合物性能稳定、免疫作用快、免疫力强。

本发明的目的还在于提供一种鸡传染性支气管炎抗原抗体复合物的制备方法，该方法操作简单，成本低。

为实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现：首先按常规方法制备抗原，然后制得抗体，最后将抗原抗体按最合适的比例进行配比。具体实施方案如下：

1.抗原的制备

（1）病毒的繁殖：Massachusetts41病毒株接种鸡胚，繁殖温度为35-37℃，每天照两次蛋，收获24-60h死亡的鸡胚尿囊液；对于60h的活胚需置2-8℃过夜，然后收获尿囊液，收获尿囊液时，需弃去24h之前死亡的鸡胚；对收获的病毒尿囊液进行检验，凡菌检为阳性，毒价≥10⁷EID₅₀/0.1mL，作为制备疫苗的部分的抗原液。

（2）病毒液的浓缩、纯化：用醋酸锌沉淀法浓缩病毒液，Sepharose 4FF凝胶层析柱纯化病毒液。

2.抗体的制备

用抗原配制油乳剂灭活疫苗免疫25日龄的SPF鸡,胸部肌肉分点注射,免疫3次,每次间隔2周,最后1次免疫是在第3周后用活毒加强免疫1次,第2周后心脏无菌采血分离血清,初步得到的IBV抗血清，首先在54-58℃的水浴锅中水浴20-40min灭活补体,在3-5℃下以4000-6000r/min离心20-40min,吸取淡黄色上清液作为制备疫苗的抗体。经检验,制备的抗体无菌,血凝抑制价大于1：2⁸的血清经检验合格后保存备用。

3.抗原抗体复合物疫苗的配制及检测

用制备好的抗原和抗体按不同的体积比例进行复合，抗原与抗体的体积比分别为：3:4～8，加入冻干保护剂充分混合后进行真空冻干。配制成抗原抗体复合物疫苗用HA试验检测复合物的血凝价，并按常规方法测定复合物的EID₅₀。制备的抗原抗体复合物每份所含的抗原量与常规疫苗所含的抗原量一样。经试验测定，复合物的HA效价在抗原抗体的比例在3:4～8时效价最大，免疫力效果最好。

本发明获得的复合物具有性能稳定、安全性好、动物免疫后产生免疫作用快、免疫力强、保护率高特点。

具体实施方式

下面结合一些具体实施方式对本发明进一步详细介绍。

实施例1

（1）病毒的繁殖：Massachusetts41病毒株接种鸡胚，繁殖温度为35℃，每天照两次蛋，收获24-60h死亡的鸡胚尿囊液；对于60h的活胚需置5℃过夜，然后收获尿囊液，收获尿囊液时，需弃去24h之前死亡的鸡胚；对收获的病毒尿囊液进行检验，凡菌检为阴性，毒价≥10⁷EID₅₀/0.1mL，作为制备疫苗的部分的抗原液。

（2）病毒液的浓缩、纯化：用醋酸锌沉淀法浓缩病毒液，Sepharose 4FF凝胶层析柱纯化病毒液。

（3）用抗原配制油乳剂灭活疫苗免疫25日龄的SPF鸡,胸部肌肉分点注射,免疫3次,每次间隔2周,最后1次免疫3周后用活毒加强免疫1次,2周后心脏无菌采血分离血清,初步得到鸡传染性支气管炎病毒IBV血清；

（4）56℃水浴30min灭活补体,在4℃以5000r/min离心30min,淡黄色上清液作为制备疫苗的抗体；