[发明专利]一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法及其应用

权利要求书

1.一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法，其特征在于具体包括如下步骤：

（1）、将待测果蔬样品溶液推入固定化有农药快速检测所用酶的反应器内，于该农药快速检测所用酶的最适温度范围内进行酶抑制反应；

所述的农药快速检测所用酶为胆碱酯酶、非胆碱酯酶的B-酯酶、酪氨酸酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶或乙酰乳酸合酶；

其中所述的胆碱酯酶为乙酰胆碱酯酶或丁酰胆碱酯酶；

所述的固定化有农药快速检测所用酶的反应器，该反应器可以实现液体自由进出反应器，而固定化的农药快速检测所用酶不能流出反应器；

（2）、将足量的缓冲液持续推入该固定化有农药快速检测所用酶的反应器，将步骤（1）进行酶抑制反应后的果蔬样品溶液持续带出固定化有农药快速检测所用酶的反应器至废液池，直至待测果蔬样品溶液颜色全部带走为止。

2.如权利要求1所述的一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法，其特征在于所述的固定化有农药快速检测所用酶的反应器中的农药快速检测所用酶在反应器中的固定化方法如下：

采用离子交换吸附将农药快速检测所用酶固定在40-60目的大孔径弱酸性离子交换树脂颗粒上，然后装载于反应器内；

或采用碳二亚胺法将农药快速检测所用酶直接固定在活化后的反应器内表面上。

3.如权利要求1所述的一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法，其特征在于所述的待测果蔬样品溶液的制备过程如下：

切碎的果蔬按料液质量体积比1：1-1：5加入pH与农药快速检测所用酶相适应的磷酸盐缓冲液混合，在室温下搅拌，过滤后获得的滤液即为待测果蔬样品溶液。

4.如权利要求1、2或3所述的一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法在果蔬农药残留快速检测中的应用。

5.如权利要求1、2或3所述的一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法在果蔬农药残留快速检测中的应用，其特征在于具体包括如下步骤：

（1）、将待测果蔬样品溶液推入固定化有农药快速检测所用酶的反应器内，于农药快速检测所用酶的最适温度范围内进行酶抑制反应；

（2）、将足量的磷酸盐缓冲液持续推入该固定化有农药快速检测所用酶的反应器，并持续将步骤（1）酶抑制反应后的样品溶液带出固定化有农药快速检测所用酶的反应器至废液池，直至待测果蔬样品溶液颜色全部带走为止；

（3）、步骤（2）待测果蔬样品溶液颜色全部带走后将底物推入固定化有农药快速检测所用酶的反应器中，于农药快速检测所用酶的最适温度范围内进行酶催化水解反应；

（4）、步骤（3）酶催化水解反应完成后推入磷酸盐缓冲液，将固定化有农药快速检测所用酶的反应器中酶催化水解反应产生的产物全部带出至显色池中，加入显色剂与其进行显色反应后，测定吸光度值A3； 

（5）、将等比例的磷酸盐缓冲液和显色液推入显色池混合，作为空白对照，测得吸光度值A1；

（6）、用等量的磷酸盐缓冲液代替待测果蔬样品溶液作为对照样液，重复上述步骤（1）至步骤（4），测定显色池中的显色反应后所得的对照样液的吸光度值A2；

（7）、通过上述的测定结果，计算农药快速检测所用酶的抑制率,并根据国标GBT5009.199-2003进行判断农药超标或符合标准；

抑制率=[(A2-A1)-(A3-A1)]/(A2-A1)*100%；

其中，A1为空白对照的吸光度值；

A2为对照样液的吸光度值；

A3为待测果蔬样品溶液最终经显色反应后的吸光度值。