[发明专利]猪圆环病毒ORF2基因原核表达分泌蛋白的纯化方法无效
| 申请号： | 201210304135.8 | 申请日： | 2012-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN102977193A | 公开（公告）日： | 2013-03-20 |
| 发明（设计）人： | 吴红云;李建正;徐进;李厚伟 | 申请（专利权）人： | 郑州后羿制药有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/01 | 分类号： | C07K14/01;C07K1/16 |
| 代理公司： | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人： | 牛爱周 |
| 地址： | 451162 河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 圆环 病毒 orf2 基因 表达 分泌 蛋白 纯化 方法 | ||
1.一种猪圆环病毒ORF2基因原核表达分泌蛋白的纯化方法，其特征在于，具体步骤如下：
1）取菌体，超声波破碎，离心，取上清液；
2）上样，缓冲液A洗去层析柱中未结合蛋白；
3）依次用缓冲液B1、B2、B3、B4、B5和B6洗去杂质蛋白；
4）依次用缓冲液C1、C2、C3、C4、C5、C6、D1、D2和D3洗脱目的蛋白，即得含目的蛋白的流穿液。
2.根据权利要求1所述的一种猪圆环病毒ORF2基因原核表达分泌蛋白的纯化方法，其特征在于，所述的缓冲液A为：
0.2M Na2HPO4
0.2M NaH2PO4
0.15M NaCl。
3.根据权利要求1所述的一种猪圆环病毒ORF2基因原核表达分泌蛋白的纯化方法，其特征在于，所述的缓冲液B1为：
0.2M Na2HPO4
0.2M NaH2PO4
0.15M NaCl
5mM 咪唑。
4.根据权利要求1所述的一种猪圆环病毒ORF2基因原核表达分泌蛋白的纯化方法，其特征在于，所述的缓冲液B6为：
0.2M Na2HPO4
0.2M NaH2PO4
0.15M NaCl
80mM 咪唑。
5.根据权利要求1所述的一种猪圆环病毒ORF2基因原核表达分泌蛋白的纯化方法，其特征在于，所述的缓冲液C4为：
PH7.0
0.2M Na2HPO4
0.2M NaH2PO4
0.15M NaCl。
6.根据权利要求1所述的一种猪圆环病毒ORF2基因原核表达分泌蛋白的纯化方法，其特征在于，所述的缓冲液D2为：
PH7.0
0.2M Na2HPO4
0.2M NaH2PO4
0.15M NaCl
200mM 咪唑。
7.根据权利要求1所述的一种猪圆环病毒ORF2基因原核表达分泌蛋白的纯化方法，其特征在于，咪唑浓度为5mM和80mM的缓冲液B1和B6能有效去除杂质蛋白。
8.根据权利要求1所述的一种猪圆环病毒ORF2基因原核表达分泌蛋白的纯化方法，其特征在于，缓冲液D2洗脱目的蛋白的纯度为85%。
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