[发明专利]天然药物制剂中藁本内酯的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，尤其是一种天然药物制剂中藁本内酯的测定方法。

背景技术

藁本内酯是中药当归、川芎中的重要活性成份之一，其是具淡黄色带香味的油状液体，沸点为168~169℃，可溶于乙醇、甲醇、乙醚、乙酸乙酯、石油醚等有机溶剂，分子式为 C₁₂H₁₄O₂ ,相对分子质量为190.24，其结构式如下：

。

藁本内酯的化学结构为不饱和的苯酞结构，3位上有活泼的丁烯基，均为化学不稳定性因素，容易发生多种异构化反应。

目前，含有藁本内酯的天然药物制剂中藁本内酯的含量测定方法主要有HPLC和GC方法，蒋伟，王长虹等人公开了一种利用HPLC对当归提取物中藁本内酯进行定量分析的方法（当归提取物的制备工艺及其质量控制，《华西药学杂志》，2010，25（1）：87~89），采用C₁₈色谱柱，以磷酸水溶液-乙腈二元系统为流动相进行梯度洗脱，流速1.0mL*min^-1，检测波长350nm，以藁本内酯纯品作为对照，采用外标法测定样品中的藁本内酯含量。

李桂生，马成俊等人研究发现（藁本内酯的稳定性研究及异构化产物的GC-MS分析，《中草药》，2000，31（6）：405~407），藁本内酯纯品于室温条件下保存可生成多种异构化产物，其主要产物有8种，占异构化产物的90.81%。而藁本内酯在挥发油中基本稳定，不会出现纯品状态下的异构化反应。

现有的藁本内酯测定方法需要以藁本内酯纯品为对照品，由于藁本内酯纯品稳定性极差，极易异构化为其他结构相近的苯酞类化合物，因此不能作为国家法定含量测定用对照品对藁本内酯进行定量检测，往往需要自行提取、纯化，并且难以长期保存，给测定工作带来极大的不变，增加了检测的难度和成本。目前缺少一种操作简便、稳定、成本低廉的藁本内酯测定方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种稳定性好、成本低廉的藁本内酯的测定方法，能够简便、准确地测定天然药物制剂中藁本内酯的含量。

为实现本发明目的，本发明人所采用的技术方案为：

天然药物制剂中藁本内酯的测定方法，其包括以下步骤：

（a）称取含有藁本内酯的天然药物制剂内容物，加入到含有碱金属氢氧化物的乙腈水溶液中，摇匀后于20~30℃下放置1~3天，加入盐酸调节pH至中性，加入乙腈水溶液定容，摇匀后过滤，续滤液为供试品溶液；

（b）称取2-（1-戊酮）-1，5-环已二烯甲酸，加甲醇配制成对照品溶液，所述对照品溶液中2-（1-戊酮）-1，5-环已二烯甲酸的含量为0.05~0.4mg/mL；

（c）采用高效液相色谱法分别测定对照品溶液和供试品溶液，色谱条件为：采用以十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱，以乙腈或甲醇水溶液作为流动相，流动相的流速为0.5 ~2 mL/min，检测波长为285nm，柱温为20~40℃，以外标法计算供试品溶液中2-（1-戊酮）-1，5-环已二烯甲酸的含量，按照藁本内酯与2-（1-戊酮）-1，5-环已二烯甲酸的摩尔比1:1的比例，换算得到藁本内酯的含量。

本发明所述碱金属氢氧化物最好为氢氧化钠或氢氧化钾，如此水解反应更加迅速和充分。

c步骤所述乙腈/水溶液其体积比为20~45：80—55；甲醇/水溶液的体积比为40~65:60~35；所述乙腈水溶液或甲醇水溶液的pH值控制在2~7；调节pH值时，可选用醋酸或磷酸进行调节。

优选乙腈/水的体积比为35：65；甲醇/水的体积比为55：45。

优选上述条件时检测时，色谱峰形好，2-（1-戊酮）-1，5-环已二烯甲酸与杂质峰分离度高。

b步骤所述2-（1-戊酮）-1，5-环已二烯甲酸的制备方法为：   

取当归油，加入80倍体积比浓度为25%的乙腈水溶液，所述乙腈水溶液中含有质量体积比为2—3%的氢氧化钾，20~30℃下放置1~3天，加盐酸调节 pH值至中性，加入等体积的二氯甲烷提取，提取液减压浓缩，浓缩液上硅胶柱，依次以体积比浓度为10%、20%、30%丙酮/石油醚混合液进行梯度洗脱，分别收集不同的流份，进行检测，检测条件如下：