[发明专利]一种小牛血去蛋白提取物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种小牛血去蛋白提取物及其制备方法，以及小牛血去蛋白提取物在制剂中的应用。

背景技术

小牛血去蛋白提取物由Jaeger KH于20世纪60年代研制成功, 主要由无机离子钾、氯、钠等及小分子多肽、氨基酸、核苷酸、酮酸等物质组成，能够促进细胞对葡萄糖和氧的摄取和利用，促进线粒体呼吸，促进组织的复原和再生，能保护大脑神经细胞，减轻脑缺血再灌注损伤，改善大脑中氧和能量供应，消除氧自由基、促进神经细胞修复等作用。特别对中风、颅脑外伤等器质性精神障碍有特殊的疗效，对创伤、溃疡、灼伤等损伤组织也有促进愈合的作用。小牛血去蛋白提取物进口制剂如瑞士素高公司生产的素高捷疗眼膏、奥地利奈科明的爱维治已进入中国市场，国产制剂生产商也有数家，如锦州奥鸿药业有限责任公司、黑龙江江世药业有限公司、吉林康乃尔药业有限公司等等，其中制剂原料有来自血清、全血、红细胞三种形式。

专利96120777、200510132478.0公开了一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，包括：采幼牛静脉血，分离出血清，用乙醇去蛋白，减压去除乙醇，加入复合蛋白酶水解，离心分离留上清，将上清液中的乙醇浓缩，浓缩液用超滤截留，即得到小牛血去蛋白提取液。该方法采用低温离心方式进行分离，对工艺设备要求较高，同时能耗也较大。

专利200710194950.2公开了一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，包括：采幼牛静脉血，离心得到血清，加热除蛋白，滤液浓缩后加乙醇进行醇沉，过滤并浓缩滤液，得到醇沉后的滤液，滤液调酸性并加入活性炭脱色，过滤收集滤液，滤液调至碱性，冷冻除蛋白，过滤得到的滤液用纤维膜超滤除高分子物质，反复2～5次，过滤即得到小牛血去蛋白提取物。该方法冷冻除蛋白的条件为-50～0℃，时间为12～72小时，且需反复2～5次，工序较长，能耗较大。

专利200610080520.3公开了一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，包括：采幼牛静脉血，分离出血清，用乙醇去蛋白，减压去除乙醇，加入复合蛋白酶水解，离心分离留上清，上清液以截留分子量为5000道尔顿的中空纤维柱超滤，然后分别过葡聚糖G-15凝胶柱、Sephadex-50凝胶柱，特征性收集280nm处有特异吸收的馏分，最后采用微孔滤膜过滤和紫外线灭活。该方法采用葡聚糖G-15凝胶柱、Sephadex-50凝胶柱分离纯化，分离效率偏低，产业化存在一定难度。

专利200810094486.4公开了一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，包括：小牛血清用96%乙醇进行醇沉，离心后留上清浓缩后用截留分子量100000D的中空纤维柱粗滤，滤液依次用甲苯、乙酸乙酯、正丁醇萃取，保留水层，水层溶液浓缩后用BIO-GEL-P2凝胶层析分离；即为小牛血清去蛋白提取液。该方法采用有机溶剂萃取和柱层析结合的方式进行分离纯化，不仅会导致效率不高，同时甲苯二类溶剂会影响产品的安全性。

专利200710117951.7公开了一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，包括：小牛血清先用纱布粗滤，去除纤维蛋白后，以5000~10000rpm离心1~2min，然后依次用滤纸过滤、0.2μm滤膜精滤、10000~20000分子量的超滤器进行超滤、5000-8000分子量的超滤器进行超滤，将超滤液浓缩后调pH值至6.5~7.5，灭菌后冷冻1~2d，缓化放置3~15d，调pH值至5.5~6.5，再用6000分子量的超滤器进行超滤，经0.2μm滤膜精滤和灭菌。该方法生产周期长，会影响生产效率；灭菌冷冻后缓化3~15天对工作厂地大小和环境有较高要求，将制约生产产能和生产效率。

专利200810148841.1公开了一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，包括：小牛血全血依次经过酸沉、冷冻、融化、收集离心后上清液，上清液依次再经过碱沉、冷冻、融化、离心，离心上清液再进行酸沉，上清液依次进行反渗透浓缩、中空纤维柱超滤。该方法需要冷冻至-20℃，再在40℃条件下融化，整个生产周期长，生产效率不高。

专利200910246717.3、200510076914.7制备方法中均加入了枸椽酸钠，并在低温保存后收集上清液，上清液加入胃蛋白酶酶解，并过活性碳柱或者壳聚糖改性活性碳柱。该制备方法采用了酶解工艺，容易产生杂质，同时上清液过活性炭柱无法控制产品的无菌。