[发明专利]迷人杜鹃的组培繁殖方法

说明书

技术领域：

本发明属于植物生物技术领域，具体地说，涉及杜鹃花迷人杜鹃的组织培养快繁方法。

背景技术：

迷人杜鹃Rhododendron agastum是云南野生杜鹃花的自然杂交种。迷人杜鹃隶属于杜鹃花科(Ericaceae)杜鹃花属(Rhododendron)常绿杜鹃亚属，常绿灌木至小乔木。迷人杜鹃的花粉红至深粉红色，花筒内有或多或少的斑点，花色鲜艳，具有较高的观赏价值，经申请人多年的研究，已证明迷人杜鹃为马缨杜鹃和大白花杜鹃的自然杂交种，见文章“Natural hybridization origin of Rhododendron agastum(Ericaceae)in Yunnan,China:inferred from morphological and molecular evidence”发表于《Journal of Plant Research》(2007)120:457–463。由于迷人杜鹃为马缨杜鹃和大白花杜鹃的自然杂交种，且经过申请人多年试验，迷人杜鹃的种子成苗和扦插较为困难。迄今，迷人杜鹃没有相关生物技术方法繁殖的报道，为了使迷人杜鹃优良的特性能够保存和可持续利用，需要研究该种的组织培养，并形成一套专门的组织培养繁殖技术体系。

发明内容：

本发明的目的是提供迷人杜鹃的组织培养方法，使之在生根扦插困难的情况下能够繁衍，使该品种的优良性状的保存能够得到保障，同时缩短离体培养时间，提高生根率和幼苗移栽率，为迷人杜鹃的可持续利用提供组培种苗繁育技术。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

迷人杜鹃的组培繁殖方法，包括外植体消毒、丛生芽诱导、壮苗并生根培养、试管苗移栽步骤，其特征在于取迷人杜鹃的种子进行丛生芽诱导、壮苗、生根培养，培养的温度为20-23℃，湿度为30-45%，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX；所述的种子萌发培养基为改良Anderson+0.1mg/L NAA，丛生芽诱导培养基为改良Anderson+2.1mg/L2-IP+0.1mg/L NAA，pH5.7，壮苗培养基为改良Anderson+0.5mg/L2-IP+0.1mg/L NAA，生根培养基为1/2改良Anderson+1mg/L NAA，其中改良Anderson培养基为NH4NO3减半。

所述外植体消毒先用5%的洗衣粉水，浸泡清洗10min，用无菌水冲洗至无泡沫，后用70%的酒精消毒40s，无菌水冲洗3-5遍后，用0.1%升汞溶液进行消毒6min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍。

所述移栽是组培苗在培养瓶内生根培养45天以后，炼苗7天，再移栽于温室大棚中。

所述移栽基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4-5.5。

所述移栽在上午8-11点，温度为18-25℃下进行。

本发明的方法可具体描述为：取迷人杜鹃种子为外植体，用5%的洗衣粉水进行浸泡10分钟后反复冲洗3-5遍直至无泡沫，然后用75%酒精消毒40s，后用0.1%升汞溶液进行消毒6min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍，将种子置于消毒后的滤纸上吸干水分，接种至诱导萌发培养基改良Anderson+0.1mg/L NAA，pH5.7，温度20-23℃，湿度30-45%，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，长出无菌苗后转接入丛芽诱导培养基改良Anderson+2.1mg/L2-IP+0.1mg/L NAA中进行增殖，待丛生芽长到2-3cm转入壮苗培养基改良Anderson+0.5mg/L2-IP+0.1mg/L NAA进行壮苗，其中改良Anderson培养基为NH₄NO₃减半，完成壮苗周期后将苗转入生根培养基，生根培养基为1/2改良Anderson+1mg/LNAA，45天生根培养后进行组培苗炼苗7天后，在上午8-11点，移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4-5.7，湿度50-60%的大棚内，每天早晚各喷水一次。