[发明专利]一种金柑多糖的高效提取纯化方法

权利要求书

1.一种金柑多糖的高效提取纯化方法，其特征在于：将新鲜金柑榨汁，采用微波、超声波耦合动态逆流浸提技术进行浸提，经离心过滤得到金柑水提液，再采用酶法结合Sevag法脱蛋白、大孔吸附树脂脱色素得到金柑多糖溶液，经DEAE Sepharose CL-6B离子交换柱、Sephacryl S-400 HR凝胶柱分离，再经超滤、减压浓缩、醇沉、冷冻干燥、粉碎制得金柑多糖的精制干粉。

2. 根据权利要求1所述的金柑多糖的高效提取纯化方法，其特征在于：所述方法的具体步骤为：

（1）筛选新鲜金柑，经清洗、去核、榨汁，备用；

（2）将金柑汁由一端进料口按液料比10:1~30:1定量送入微波提取室，微波功率400~620W，微波处理时间15~30min；

（3）在超声波浸提室，溶剂由另一端进液口经流量计控量注入，溶剂自进液口向出料口流动，待溶剂流动稳定时，将步骤（2）中物料螺旋输送入超声波浸提室，液料比为20:1~30:1，超声波功率160~250W，超声波作用时间20~45min，在螺旋装置的推动下，溶剂与金柑形成流向相反的连续动态逆流进行充分混合提取，提取所得浸提液由出料口进入下一步工序；

（4）步骤（3）的浸提液离心除去不溶性杂质，得到金柑水提液；

（5）将步骤（4）的金柑水提液，加入蛋白酶40℃酶解60~80min，然后采用Sevag法脱蛋白，脱蛋白3次后离心，得到上清液；

（6）将步骤（5）的上清液，过大孔吸附树脂进行脱色，所选大孔吸附树脂为D101，脱色后得到金柑多糖溶液；

（7）将步骤（6）的金柑多糖溶液，过平衡好的DEAE Sepharose CL-6B离子交换柱进行分离纯化，用蒸馏水和0.1~1mol/L 的NaCl溶液进行分段洗脱，用苯酚硫酸法跟踪检测流出的组分，分别收集洗脱峰，得到洗脱液；

（8）将步骤（7）的洗脱液，过平衡好的Sephacryl S-400 HR凝胶过滤柱进行进一步的分离纯化，用0.1~1mol/L 的NaCl溶液进行洗脱，用苯酚硫酸法跟踪检测流出的组分，分别收集洗脱峰，得到洗脱液；

（9）将步骤（8）的洗脱液分别通过中空纤维超滤膜脱盐并将其浓缩，其截留分子量为5000Dal，工作压力控制在0.2MPa~0.7MPa，温度20~60℃，得到金柑多糖溶液；

（10）将步骤（9）所得金柑多糖浓缩至原体积的3/10~2/5，加入质量分数为80%的乙醇溶液醇沉过夜，所得沉淀冷冻干燥后，粉碎过60目筛，即得到金柑多糖的精制干粉。  

3.根据权利要求2所述的金柑多糖的高效提取纯化方法，其特征在于：步骤（3）中所述的溶剂是纯净水。