[发明专利]制备美登木素生物碱抗体缀合物的方法

权利要求书

1.制备抗体-细胞毒性剂缀合物的方法，该方法包括下列步骤：

(a)用双功能交联试剂接触抗体，以使连接体与抗体共价连接，从而制备第一混合物，该混合物包含其上结合了连接体的抗体,

(b)通过在pH为大约4至大约9的溶液中使其上结合了连接体的抗体与细胞毒性剂起反应，使细胞毒性剂与第一混合物中其上结合了连接体的抗体缀合，以制备第二混合物，该混合物包含(i)通过连接体与细胞毒性剂化学偶联的抗体，(ii)游离细胞毒性剂和(iii)步骤(b)期间产生的反应副产物，以及

(c)使第二混合物经受切向流过滤、选择性沉淀、吸附过滤、吸附色谱法或其组合，以从第二混合物的其它成分中纯化通过连接体与细胞毒性剂化学偶联的抗体，从而制备纯化的通过连接体与细胞毒性剂化学偶联的抗体的第二混合物；

其中所述第一混合物不经受纯化。

2.权利要求1的方法，其中所述的吸附色谱法选自羟磷灰石色谱法、疏水电荷诱导色谱法、疏水作用色谱法、离子交换色谱法、混合式离子交换色谱法、固定化金属离子亲和色谱法、染料配体色谱法、亲和色谱法、反相色谱法及其组合。

3.权利要求1的方法，其中步骤(b)中的溶液的pH为大约4至大约6.0。

4.权利要求1的方法，其中步骤(b)中的溶液的pH为大约6.5至大约9。

5.权利要求1的方法，其中步骤(b)中的溶液包含蔗糖。

6.权利要求1的方法，其中步骤(b)中的溶液包含缓冲剂，其选自柠檬酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂、琥珀酸盐缓冲剂和磷酸盐缓冲剂。

7.制备抗体-细胞毒性剂缀合物的方法，该方法包括下列步骤:

(a)用双功能交联试剂接触抗体，以使连接体与抗体共价连接，从而制备第一混合物，该混合物包含其上结合了连接体的抗体,

(b)使第一混合物经受选择性沉淀、吸附过滤或吸附色谱法，从而制备纯化的其上结合了连接体的抗体的第一混合物，

(c)通过在pH为大约4至大约9的溶液中使其上结合了连接体的抗体与细胞毒性剂起反应，使细胞毒性剂与纯化的第一混合物中其上结合了连接体的抗体缀合，以制备第二混合物，该混合物包含(i)通过连接体与细胞毒性剂化学偶联的抗体，(ii)游离细胞毒性剂和(iii)反应副产物，以及

(d)使第二混合物经受切向流过滤、选择性沉淀、吸附过滤或吸附色谱法，以从第二混合物的其它成分中纯化通过连接体与细胞毒性剂化学偶联的抗体，从而制备纯化的通过连接体与细胞毒性剂化学偶联的抗体的第二混合物。

8.权利要求7的方法，其中在步骤(d)中使用切向流过滤。

9.权利要求7的方法，其中在步骤(b)中使用吸附色谱法，并在步骤(d)中使用切向流过滤。

10.制备抗体-细胞毒性剂缀合物的方法，该方法包括下列步骤:

(a)用双功能交联试剂接触抗体，以使连接体与抗体共价连接，从而制备第一混合物，该混合物包含其上结合了连接体的抗体，

(b)使第一混合物经受切向流过滤、选择性沉淀、吸附过滤或吸附色谱法，从而制备纯化的其上结合了连接体的抗体的第一混合物，

(c)通过在pH为大约4至大约9的溶液中使其上结合了连接体的抗体与细胞毒性剂起反应，使细胞毒性剂与纯化的第一混合物中其上结合了连接体的抗体缀合，以制备第二混合物，该混合物包含(i)通过连接体与细胞毒性剂化学偶联的抗体、(ii)游离细胞毒性剂和(iii)反应副产物，以及

(d)使第二混合物经受选择性沉淀、吸附过滤或吸附色谱法，以从第二混合物的其它成分中纯化通过连接体与细胞毒性剂化学偶联的抗体，从而制备纯化的通过连接体与细胞毒性剂化学偶联的抗体的第二混合物，

条件是，如果在步骤(b)中所述第一混合物经受切向流过滤，那么在步骤(d)中所述第二混合物不经受吸附色谱法。

11.权利要求10的方法，其中在步骤(b)和(d)中使用吸附色谱法。

12.权利要求7～11任何一项的方法，其中所述的吸附色谱法选自羟磷灰石色谱法、疏水电荷诱导色谱法、疏水作用色谱法、离子交换色谱法、混合式离子交换色谱法、固定化金属离子亲和色谱法、染料配体色谱法、亲和色谱法、反相色谱法及其组合。