[发明专利]莱克多巴胺-克伦特罗荧光微球检测试纸条及制备与应用

权利要求书

1.一种莱克多巴胺-克伦特罗荧光微球检测试纸条，包含附着于底板上且依次紧密相连的样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫；其特征在于：结合垫上含有荧光聚苯乙烯微球标记蛋白；层析膜上设置有两条检测线和一条质控线，检测线靠近结合垫，质控线靠近吸水垫；一条检测线上包被有莱克多巴胺蛋白质偶联物，另一条检测线上包被有克伦特罗蛋白质偶联物，质控线上包被有能与荧光聚苯乙烯微球标记蛋白中的蛋白结合且不和莱克多巴胺和克伦特罗结合的蛋白偶联物；荧光聚苯乙烯微球标记蛋白为荧光聚苯乙烯微球标记的莱克多巴胺单克隆抗体和荧光聚苯乙烯微球标记的克伦特罗单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的莱克多巴胺-克伦特罗荧光微球检测试纸条，其特征在于：

所述的样品吸收垫的材质为玻璃纤维膜；

所述的结合垫的材质为聚酯膜；

所述的层析膜的材质为硝酸纤维素膜；

所述的吸水垫的材质为吸水纸；

所述的质控线由羊抗鼠免疫球蛋白G溶液制备得到。

3.根据权利要求1所述的莱克多巴胺-克伦特罗荧光微球检测试纸条，其特征在于：所述的荧光聚苯乙烯微球标记蛋白通过如下方法制备得到：

（1）荧光聚苯乙烯微球的活化：将荧光聚苯乙烯微球分散于吐温-20水溶液中，得到荧光聚苯乙烯微球悬液，离心，收集沉淀；沉淀用4-吗啉乙磺酸缓冲溶液溶解后，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，再加入N-羟基琥珀酰亚胺，混匀后反应30～60min，离心洗涤沉淀，再用MES缓冲液溶解沉淀，得到活化后的荧光聚苯乙烯微球悬液；其中，1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺与荧光聚苯乙烯微球按30～50mg/（1.5×10¹¹个）配比；N-羟基琥珀酰亚胺与荧光聚苯乙烯微球按20～30mg/（1.5×10¹¹个）配比；

（2）荧光聚苯乙烯微球标记蛋白溶液的制备：将莱克多巴胺单克隆抗体和克伦特罗单克隆抗体加入到步骤（1）制备的活化后的荧光聚苯乙烯微球悬液中，混匀后搅拌反应1～3h；接着加入甘氨酸，搅拌反应0.5～2h，离心洗涤，沉淀用封闭溶液溶解后进行超声处理，得到封闭后的荧光微球标记抗体悬液。

4.根据权利要求3所述的莱克多巴胺-克伦特罗荧光微球检测试纸条，其特征在于：

步骤（1）中所述的荧光聚苯乙烯微球的直径为50～200nm；

步骤（1）中所述的吐温-20水溶液的浓度为体积百分比0.5%；

步骤（1）中所述的离心的条件为12000～13000rpm离心15～30min；

步骤（1）中所述的4-吗啉乙磺酸缓冲液为0.1M、pH值为5.5的4-吗啉乙磺酸缓冲液；

步骤（1）中所述的离心洗涤沉淀的次数为2～3次，离心转速为10000～11000rpm，每次离心1～2min；

步骤（2）中所述的莱克多巴胺单克隆抗体与所述的荧光聚苯乙烯微球按质量比20～100μg/（1.5×10¹¹个）配比；

步骤（2）中所述的克伦特罗单克隆抗体与所述的荧光聚苯乙烯微球按质量比20～100μg/（1.5×10¹¹个）配比；

步骤（2）中所述的甘氨酸的用量为每1.5×10¹¹个荧光聚苯乙烯微球使用0.01～0.03mol甘氨酸；

步骤（2）中所述的离心洗涤的次数为2～3次，离心转速为7000～9000rpm，每次离心1～2min；

步骤（2）中所述的封闭溶液为含质量体积比40～60%蔗糖、质量体积比1～2%牛血清白蛋白和体积百分比1～2%吐温-20的磷酸盐缓冲液；磷酸盐缓冲液的浓度为0.015M，pH值为7.4；

步骤（2）中所述的超声处理的条件为100W、2～4min。