[发明专利]昆虫细胞系的建立方法

权利要求书

1.一种昆虫细胞系的建立方法，其特征在于经过下列步骤：

1）用质量浓度为65～80%的酒精溶液，对昆虫虫体进行灭菌处理1～5min，用无菌水洗2～4次，用滤纸吸去水份；

2）在显微镜下挑取步骤1）的昆虫放入PBS溶液进行常规清洗；

3）将步骤2）的清洗昆虫转入装有质量浓度为0.10～0.25%的胰酶溶液的1.5～2ml离心管中，将昆虫剪碎至0.5～1mm³，消化处理5～10min，得昆虫细胞悬液；

4）将步骤3）的细胞悬液吸入12.5～25cm²的培养瓶中，每瓶装入量为0.5～1ml，用改良培养基补足至4～5ml，所述每1000毫升改良培养基中含有下列组分：

Grace培养基             40～50g

海藻糖                  0.5～3g

酵母抽提物               0.5～3g

胎牛血清              100～200ml

水                          余量；

5）将步骤4）的装有细胞悬液及改良培养基的培养瓶，置于25～28℃的培养箱中，密闭无光照培养至细胞增殖并生长至铺满甁底；

6）将步骤5）的铺满甁底的细胞进行常规悬浮并混匀后，以2:1或3:1的比例分瓶，并加入新鲜的改良培养基补充至4～5ml，继续在密闭无光照培养条件下培养至细胞增殖，如此传代培养至50代，使昆虫细胞系建立。