[发明专利]一种联合细胞模型及其制备方法和用途有效
申请号: | 201210310084.X | 申请日: | 2012-08-28 |
公开(公告)号: | CN102876633A | 公开(公告)日: | 2013-01-16 |
发明(设计)人: | 赵军宁;鄢良春;吴懿 | 申请(专利权)人: | 四川省中医药科学院 |
主分类号: | C12N5/09 | 分类号: | C12N5/09;C12N5/071;C12Q1/02 |
代理公司: | 成都高远知识产权代理事务所(普通合伙) 51222 | 代理人: | 李高峡;全学荣 |
地址: | 610041 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 联合 细胞 模型 及其 制备 方法 用途 | ||
1.一种联合细胞模型,其特征在于:它包括Caco-2细胞模型和大鼠原代肝细胞模型,所述Caco-2细胞模型与大鼠原代肝细胞模型以半透膜相隔。
2.根据权利要求1所述的联合细胞模型,其特征在于:所述半透膜为聚碳酸酯膜、聚酯膜或混合纤维素膜,膜孔径为0.4~8.0μm。
3.根据权利要求2所述的联合细胞模型,其特征在于:所述聚酯膜为Millicell悬挂式培养皿。
4.根据权利要求1所述的联合细胞模型,其特征在于:所述Caco-2细胞模型是细胞跨膜电阻值大于等于550Ω·cm2的细胞系。
5.根据权利要求4所述的联合细胞模型,其特征在于:所述Caco-2细胞模型是细胞跨膜电阻值为550~800Ω·cm2的细胞系。
6.根据权利要求1所述的联合细胞模型,其特征在于:其是按照如下方法制备而成:
a、取Caco-2细胞,复苏,加入DMEM-20%培养液中培养,按1:3传代,培养2代后,换成DMEM-10%培养液继续传代培养;
b、取铺有鼠尾胶原的培养皿和步骤a制备的第3~15代中任意一代细胞,调整细胞密度为1.5×105个/mL,从AP侧接种到铺有鼠尾胶原的培养皿上,在培养皿BL侧加入DMEM-10%培养液,置于37℃,含5%CO2的培养箱中培养,连续培养17~25天,期间更换培养液,得载有Caco-2细胞模型的培养皿;
c、取大鼠原代肝细胞,加入RP-MI 1640培养液后混匀,得大鼠原代肝细胞混悬液;
d、取步骤c制备的大鼠原代肝细胞混悬液,调整细胞密度为1.5×105个/ml,接种于铺有鼠尾胶原的细胞培养板上,每孔加入2ml并每天换液,培养1~5天,得载有大鼠原代肝细胞模型的细胞培养板;
e、将步骤b所得载有Caco-2细胞模型的培养皿,置于步骤d所得载有大鼠原代肝细胞模型的细胞培养板之上,即可。
7.根据权利要求6所述的联合细胞模型,其特征在于:所述步骤b中:
铺有鼠尾胶原的培养皿按照如下方法制备:取Millicell悬挂式培养皿,加入浓度为50μg/ml的Ⅰ型鼠尾胶原,加样量为100μl/cm2,紫外照射1小时,放入37℃,5%CO2培养箱内过夜,PBS清洗3次,即可;
取第4代细胞;连续培养21天;更换培养液的方式为接种24h后更换培养液,前一周隔天换液,一周后每天换液。
8.根据权利要求6所述的联合细胞模型,其特征在于:步骤d中,培养3天。
9.一种制备权利要求1~8任意一项所述联合细胞模型的方法,其特征在于:它包括如下步骤:
a、取Caco-2细胞,复苏,加入DMEM-20%培养液中培养,按1:3传代,培养2代后,换成DMEM-10%培养液继续传代培养;
b、取铺有鼠尾胶原的培养皿和步骤a制备的第3~15代中任意一代细胞,调整细胞密度为1.5×105个/mL,从AP侧接种到铺有鼠尾胶原的培养皿上,在培养皿BL侧加入DMEM-10%培养液,置于37℃,含5%CO2的培养箱中培养,连续培养17~25天,期间更换培养液,得载有Caco-2细胞模型的培养皿;
c、取大鼠原代肝细胞,加入RPMI 1640培养液后混匀,得大鼠原代肝细胞混悬液;
d、取步骤c制备的大鼠原代肝细胞混悬液,调整细胞密度为1.5×105个/ml,接种于铺有鼠尾胶原的细胞培养板上,每孔加入2ml并每天换液,培养1~5天,得载有大鼠原代肝细胞模型的细胞培养板;
e、将步骤b所得载有Caco-2细胞模型的培养皿,置于步骤d所得载有大鼠原代肝细胞模型的细胞培养板之上,即可。
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