[发明专利]定向诱导合成金属硫蛋白的工艺

权利要求书

1.定向诱导合成金属硫蛋白的工艺，其特征在于所述工艺如下：

（1）选择合适的原材料配制培养基；

（2）上述培养基喷淋去离子水，保持温度25~45℃，时间48~120h，使培养基充分发酵；

（3）将九龙虫雄虫与雌虫按2：3比例混合，保持温度25~30℃，湿度60~85%，雄虫与雌虫交配5~7天产卵，虫卵在8~12天孵化出幼虫，收集幼虫；

（4）将5~8g幼虫置于前述的发酵培养基中，保持温度20~30℃、湿度60~85%培养，待幼虫第一次脱皮后超声波振荡培育；

（5）待幼虫脱皮6次后的第4~6天，收集九龙虫幼虫，用去离子水清洗，甩干九龙虫幼虫表面水分；

（6）甩干的九龙虫幼虫捣碎，加热80~100℃，时间5~10min，离心分离，收集分离液；

（7）分离液进行微滤与超滤处理，收集浓缩液；

（8）100mL浓缩液溶于1000~2000mL溶剂体系中，泵入超声驻波液相制备色谱里连续分离纯化金属硫蛋白；

（9）将分离纯化的金属硫蛋白冷冻干燥至成品。

2.根据权利要求1所述的定向诱导合成金属硫蛋白的工艺，其特征在于所述步骤（1）中，培养基由1000g麦麸或米糠、50~200g大豆豆粉、0~20g赖氨酸、0~20g甘氨酸、10~80g胱氨酸、10~20gCuSO₄、5~20gNaCl、0~20gCdSO₄、0~10gCaSO₄、0~20gZnSO₄混合而成。

3.根据权利要求2所述的定向诱导合成金属硫蛋白的工艺，其特征在于所述培养基由1000g麦麸、100~200g大豆豆粉、10~20g赖氨酸、50~80g胱氨酸、10~15gCuSO₄、5~10gNaCl、10~20gCdSO₄、5~10g CaSO₄混合而成。

4.根据权利要求2所述的定向诱导合成金属硫蛋白的工艺，其特征在于所述培养基由1000g米糠、50~100g大豆蛋白粉、10~20g甘氨酸、10~20g胱氨酸、10~20gCuSO₄、10~20gNaCl、10~20gZnSO₄混合而成。

5.根据权利要求1所述的定向诱导合成金属硫蛋白的工艺，其特征在于所述步骤（4）中，每间隔8~10h重复超声处理一次，幼虫培育周期50~80d，超声波振荡频率为250~500kHz，功率为0.1~0.5kw，时间为2~10min。

6.根据权利要求1所述的定向诱导合成金属硫蛋白的工艺，其特征在于所述步骤（7）中，分离液用膜孔径0.5~1.0μm微孔膜过滤机过滤，再用膜孔径10~120nm超滤机浓缩。

7.根据权利要求1所述的定向诱导合成金属硫蛋白的工艺，其特征在于所述步骤（8）中，溶剂体系由质量比4.5%PEG6000-质量比8.0%葡萄糖T600组成。

8.根据权利要求1所述的定向诱导合成金属硫蛋白的工艺，其特征在于所述步骤（8）中，溶剂体系由亚丁醇-乙醚-水按照10：5：12体积比组成。

9.根据权利要求1所述的定向诱导合成金属硫蛋白的工艺，其特征在于所述步骤（8）中，超声频率500~1000kHz，功率0.1~1.5kw，流速20~100ml/min，紫外检测器波长220nm。

10.根据权利要求1所述的定向诱导合成金属硫蛋白的工艺，其特征在于所述步骤（9）中，分离纯化的金属硫蛋白用真空冷冻干燥机在真空度10~50kPa、温度-30~50℃、时间15~24h干燥含水份5~6%为成品。