[发明专利]一种富集养殖家畜尿样中克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学中样品前处理领域，具体是涉及一种以磺酸基修饰的聚苯乙烯磁球富集养殖家畜尿样中克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇的方法。

背景技术

克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇为苯乙醇胺类化合物，属于β-受体激动剂类药物，可促进动物如牛、猪、羊、家禽等生长，并增强体内的脂肪分解代谢，显著提高瘦肉率。所以自20世纪80年代以来，β-受体激动剂被大量添加于饲料中，以促进家畜生长和提高瘦肉率。

β-受体激动剂易在动物组织，特别是内脏中蓄积残留，其通过食物链进入人体后可引发肌肉震颤、心律失常、头痛等症状，严重者可能危及生命。鉴于以上原因，我国已于1997将克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等列为禁止在饲料和养殖家畜饮用水中使用的药品。但是目前仍有养殖者将其违法使用在畜牧业中，引发药物残留，从而对消费者健康造成严重损害。目前检测活体动物排泄尿样中β-受体激动剂残留是判断动物饲养过程中是否添加β-受体激动剂的有效手段之一。

当前，在所有β-受体激动剂中，克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等是最为常用的三种受体激动剂。针对克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等造成的养殖家畜源性食品安全问题，建立尿样中中痕量克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺的快速、简便的分离富集方法，对提高定量检测的灵敏度以及准确性，具有重要意义。

目前，在痕量分析物的食品安全检测分析中，有将近一半的误差来源于样品的前处理，而真正来源于仪器检测的误差还不足三分之一，且近70%的工作量都耗费在样本的前处理阶段。因此，发展快速、高效的样品前处理方法，对痕量分析物进行高效快速富集后再检测，是减少痕量分析物检测误差、缩短检测时间的有效手段。

现有的养殖家畜尿样中中克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇的提取、净化方法主要参照中华人民共和国农业部行业标准（农业部1063号-3-2008文件）执行，文件中规定了养殖家畜尿样中11种β-受体激动剂残留量液相色谱-串联质谱法测定的具体流程。其中样品前处理步骤如下：取澄清养殖家畜尿样5 mL，添加内标工作液100 μL（含克伦特罗-D9、莱克多巴胺-D9和沙丁胺醇-D9各100 μg/mL），充分混匀。5 mol/L氢氧化钠调节溶液pH至9-10，加叔丁醇-叔丁基甲醚（6:4）提取液10 mL，充分震荡，7000 r/min离心10 min，移取上清，重复提取一次，合并上清，旋转蒸干（40℃）。0.2%甲酸水溶液溶解后过混合型强阳离子柱。与本发明方法相比，现有农业部行业标准样品前处理流程相对较长，包括两次提取净化以及旋转蒸干等步骤。而本方法仅需简单地调整一次尿样pH值即可。

发明内容

本发明目的提供了一种更为简便和快速有效的养殖家畜尿样中克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇高效富集的方法。

本发明中所采用的技术属于磁分散固相萃取技术范畴，磁固相萃取（Magnetic Solid Phase Extraction，MSPE）是一种以表面功能化的磁球（Magnetic Beads，MBs）为吸附剂的新型固相萃取方法。原理见图1，该磁球以超顺磁性纳米四氧化三铁为核，经非磁性聚合物材料包裹而成。通过在磁球表面修饰不同的化学功能团对目标物进行吸附。该方法结合了磁分离的简便性与分散固相萃取吸附的高效性，采用分散固相萃取模式，克服了传统固相萃取中过柱操作的缺点（如过柱耗时长、易堵塞、流速太快可造成的吸附效率下降，以及装柱时吸附剂填装不均匀密实产生的短路等问题）；同时由于磁球粒径介于纳米和亚微米之间，比表面积远大于固相萃取材料（固相萃取材料粒径范围一般为20-100 μm之间），吸附容量大，吸附剂用量少，可实现微量洗脱液洗脱，富集倍数高，且可省去常规前处理流程中的旋转蒸发等浓缩步骤；纳米材料在溶液中具有良好的单分散性，在溶液中可均匀分布，比表面积大，提高了萃取过程中吸附剂吸附待分离物的速率，缩短了吸附时间；同时可在短时间内处理大体积样品，有利于通过加大样品处理量来增加富集系数，降低检测限。

具体来说本发明的技术方案包含下列步骤：

（1）样品处理：取尿样5~10 mL，调节尿样pH至5~7；

（2）吸附：加入适量磺酸基修饰的聚苯乙烯磁球，混匀，充分吸附，磁场分离磁球，弃去上清；

（3）洗脱收集：加200-800 μL洗脱溶剂将磁球上的克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇洗脱，分离磁球，收集洗脱液；其中洗脱溶剂为含5%氨水的甲醇或乙醇溶液（即100份洗脱溶剂中95份为甲醇或乙醇，5份为氨水）。