[发明专利]一种从粗老茶中提取活性蛋白的方法

权利要求书

1.一种从粗老茶中提取活性蛋白的方法，其特征在于：所述的从粗老茶中提取活性蛋白的方法包括按顺序进行的下列步骤：

1)复合酶法预处理：将粗老茶加入到适量蒸馏水中至其全部浸没在蒸馏水中，用稀盐酸调节pH至4，然后加入占粗老茶总量0.5％～1.5％重量的由纤维素酶和果胶酶组成的复合酶，在40℃的温度下反应1～3小时，反应结束后在100℃的温度下灭活5min；

2)超声碱法提取：在上述反应液中加入碱液，所述粗老绿茶与碱液的重量比为1∶20～1∶40，碱选自氢氧化钠或氢氧化钾中的一种，碱液浓度为0.1M～0.2M，然后在超声清洗仪中搅拌提取1～2小时，之后减压过滤，收集滤液而得到含有茶蛋白的茶叶供试液；

3)等电点沉淀：向上述茶叶供试液中加入浓盐酸，以将溶液pH调至4.5，然后在4℃的温度下静置24～48小时；

4)离心分离：利用离心分离机将上述沉淀液离心分离15～20分钟，收集沉淀物；

5)冷冻干燥：将上述沉淀物重新溶解于蒸馏水中，然后置于-18℃的温度下进行冷冻，冻实之后置于-50℃的真空冷冻干燥机中进行干燥而得到茶蛋白样品；

6)木瓜蛋白酶酶解：将上述冷冻干燥后的茶蛋白样品加入到pH为6～7的PBS缓冲溶液中，之后加入木瓜蛋白酶，其中木瓜蛋白酶的用量占茶蛋白样品重量0.5～1.5％，在55～65℃的温度下反应1～3小时，反应结束后在100℃的温度下灭活5min；

7)等电点重新沉淀：向上述酶解后的反应液中加入浓盐酸，以将溶液pH调至4.5，然后在4℃的温度下静置24～48小时；

8)离心或过滤分离：利用离心分离机将上述沉淀液离心分离15～20分钟，收集沉淀物；

9)冷冻干燥：将上述沉淀物重新溶解于蒸馏水中，然后置于-18℃的温度下进行冷冻，冻实之后置于-50℃的真空冷冻干燥机中进行干燥而得到所述的茶蛋白。

2.根据权利要求1所述的从粗老茶中提取活性蛋白的方法，其特征在于：所述的步骤1)中纤维素酶与果胶酶的重量比为1∶1。

3.根据权利要求1所述的从粗老茶中提取活性蛋白的方法，其特征在于：所述的步骤2)中超声功率设定为24～40KHz。

4.根据权利要求1所述的从粗老茶中提取活性蛋白的方法，其特征在于：所述的步骤4)和步骤8)中离心分离机的转速为3000～4000转/分。