[发明专利]螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法

权利要求书

1.螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于具体包括如下步骤： 

（1）取螺旋藻粉溶于Milli-Q水中，常温下磁力搅拌，待其全部溶解后置于冰箱中冷冻中，再置于冰箱中解冻，如此反复冻融三次，然后，采用超声破碎方法，将螺旋藻壁破碎，使得蛋白质游离出来，将蛋白质置于冰浴中，最后，将获得的溶液离心，去除沉淀获得蛋白上清液, 再真空冷冻干燥，获得螺旋藻蛋白质粉；

（2）以步骤（1）得到的螺旋藻蛋白质粉为基础, 配置质量浓度为1~5%的螺旋藻蛋白水溶液，加入水解酶进行水解，水解后，灭酶，冷却至室温后将水解液离心，取上清液，然后,经截留分子量为10 KD的超滤离心管过滤，滤液再经过5 KD、10 KD的超滤离心管过滤，即可获得分子量大小范围为<5 KD、5-10 KD、>10 KD的螺旋藻多肽水解液；

(3) 以步骤（2）得到的5-10 KD的螺旋藻多肽水解液为基础, 使用葡聚糖凝胶Sephadex G-50分离纯化，并且按照出峰顺序共收集到三个峰，分别为第一个峰Y1，第二个峰Y2，第三个峰Y3；

(4) 以步骤（3）得到的纯化的螺旋藻多肽水解液Y2为基础,再采用三聚磷酸钠（TPP）离子交联法即可得到螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒Y2-CS。

2.根据权利要求1所述的螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（1）所述螺旋藻粉为5~50 g；所述Milli-Q水为100~1000 mL；所述磁力搅拌的时间为10~60 min。

3.根据权利要求1所述的螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（1）所述冷冻为在-20 ℃冰箱中冷冻80 min；所述解冻为在4 ℃冰箱中解冻。

4.根据权利要求1所述的螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（1）所述超声破碎方法为在10~300 W的超声功率下超声，每超声5~20 s间隔3~10 s,共超声10~300次。

5.根据权利要求1所述的螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（1）所述离心为在温度4 ℃,转速为5000~10000 r/min下离心10~60 min。

6.根据权利要求1所述的螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（2）所述水解酶为胰蛋白酶；所述水解为在温度30~50 ℃，pH= 5~10，酶与螺旋藻蛋白质水溶液的比1%~5%（w/v）下水解, 水解时间5~15h。

7.根据权利要求1所述的螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（2）所述灭酶为在在100 ℃水中灭酶10 min；所述离心为在5000 r/min 下离心 25 min。

8.根据权利要求1所述的螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（2）所述过滤为在6000 g、4 ℃条件下经超滤离心管过滤。

9.根据权利要求1所述的螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（3）所述葡聚糖凝胶Sephadex G-50分离纯化为在洗脱速度为0.2~2 mL/min，上样体积为1~4 mL，洗脱液为超纯水，检测波长为215 nm下分离纯化。

10.根据权利要求1所述的螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于步骤（4）所述三聚磷酸钠（TPP）离子交联法为把1~5mL浓度为0.3~2 mg/mL的螺旋藻多肽水解液Y2与3~10 mL浓度为1~4 mg/mL的壳聚糖醋酸溶液混合均匀，再将浓度为0.1~2 mg/mL的TPP水溶液逐渐滴加到Y2和壳聚糖醋酸溶液体系中，磁力搅拌反应1个小时。