[发明专利]一种整形美容用脂肪干细胞新技术

权利要求书

1.一种整形美容用脂肪干细胞新技术，其特征在于：

(1)脂肪组织的采集，无菌条件下抽取脂肪组织，于4°条件下运至GMP车间。

(2)脂肪组织的消化，用胶原酶消化脂肪组织并用含血清的培养基中止。

(3)脂肪细胞纯化，将消化液行100微米滤网过滤，并离心得到脂肪细胞和脂肪干细胞。

(4)脂肪干细胞纯化，重悬细胞沉淀，接种培养板分离纯化干细胞。

(5)脂肪干的扩增培养，将第三步得到的脂肪细胞和脂肪干细胞扩增培养，质检合格丰胸。

(6)干细胞冻存，干细胞加入二甲基亚砜后存入液氮罐。

2.根据权利要求1所述的一种整形美容用脂肪干细胞新技术，其特征是：(1)脂肪组织的采集，在无菌条件下，吸取健康自愿者皮下脂肪，同时抽取静脉血60毫升(用于干细胞扩增培养之用)。用PBS洗去脂肪组织中的血细胞，加入1％双抗，低温运至G M P车间。

3.根据权利要求1所述的一种整形美容用脂肪干细胞新技术，其特征是：(2)脂肪组织的消化，在100级GMP厂房条件下，用0.075％I型胶原酶低速37℃恒温振荡(50rpm)消化40分钟，等量体积的完全培养基(高糖DMEM+10％胎牛血清+1％双抗)中止消化。

4.根据权利要求1所述的一种整形美容用脂肪干细胞新技术，其特征是：(3)脂肪细胞纯化，将消化液吹打10-15次后，加入10mg/L Dnase I孵育10-15分钟，行100微米滤网过滤，去除块状脂肪组织和结缔组织，4°环境1000rpm 10min后去除上层油滴，将漂浮的脂肪细胞转移至新的离心管中，PBS洗涤2-3次。

5.根据权利要求1所述的一种整形美容用脂肪干细胞新技术，其特征是：(4)脂肪干细胞纯化，用1％的盐水再次洗涤细胞沉淀2-3次，接种于多聚鸟氨酸包被的培养板，培养4小时后用0.25％胰酶消化，难以消化的其它细胞将被留下。分离纯化的干细胞进行表面标记CD29、CD44、CD105和CD34、CD45检测，以及CFU-F检测，经相关质检(细胞活力、数量、微生物)合格后用于面部除皱之用。

6.根据权利要求1所述的一种整形美容用脂肪干细胞新技术，其特征是：(5)脂肪干的扩增培养，将第三步得到的脂肪细胞与脂肪干细胞置于300毫升细胞培养袋(细胞密度：100，000cells/ml)，用DMEM培养基加5％人血清及相关细胞因子(10ng/ml ITS(胰岛素、转铁蛋白、硒)，100u/ml青霉素，100u/ml链霉素，20ng/ml of rEGF，10ng/ml of LIF，20ng/ml of bFGF)培养增殖干细胞7-10天后，进行质检(细胞活力、数量、内毒素、微生物)，合格者用于丰胸。

7.根据权利要求1所述的一种整形美容用脂肪干细胞新技术，其特征是：(6)干细胞冻存，将干细胞置于细胞冻存管，加入冻存液：8％二甲基亚砜、10％BSA、20％胎牛血清、62％DMEM，先后置4°、-20°预冷，再入液氮中储存。