[发明专利]一种核酸释放试剂及核酸释放方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种核酸释放试剂及核酸释放方法。

背景技术

目前应用于荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）扩增的核酸提取方法主要有4种：（1）传统煮沸法：裂解液与血液样本混匀，高温裂解，离心得到核酸；（2）浓缩煮沸法：先用多聚糖浓缩沉淀病毒核酸，再加裂解液煮沸，离心得到核酸；（3）离心柱法：裂解后采用层析柱吸附核酸、再洗脱得到较纯的核酸；（4）磁珠法：用磁珠吸附核酸，再洗脱得到较纯的核酸。

上述前2种提取方法缺点是需要多次转管、移液、离心等步骤，样本处理耗时长，操作中难免会丢失部分核酸，使定量值偏低。离心柱法比2种煮沸法提取的核酸纯度大大提高，但手工操作多，效率低。磁珠法提取步骤简单，回收率高、纯度好，易于自动化，但产品价格十分昂贵，目前应用并不广泛。

发明内容

为了解决回收率低、操作复杂和生产成本高的问题，本发明实施例提供了一种核酸释放试剂及采用该核酸释放试剂的核酸释放方法，其技术方案如下：

一方面，本发明实施例提供了一种核酸释放试剂，由体积百分比浓度为0.5～2%的TritonX-100（聚乙二醇辛基苯基醚），质量-体积浓度为0.05～0.1mg/mL的蛋白酶K，1～10mg/mL的明胶和4～40mg/mL的NaOH组成，溶剂为无菌水。该核酸释放试剂的制备方法是：采用常规方法，将各组分充分混合均匀而制成。

优选地，所述核酸释放试剂由体积百分比浓度为0.5～1%的TritonX-100，质量-体积浓度为0.06～0.08mg/mL的蛋白酶K，5～8mg/mL的明胶和8～20mg/mL的NaOH组成，溶剂为无菌水。

另一方面，本发明实施例提供了一种采用上述的核酸释放试剂的核酸释放方法，包括：

将上述储存于-20℃的核酸释放试剂平衡至室温后摇匀，取适量加入PCR反应管再加入待测样本吸打混匀，再经过80～100℃，10min、4℃，1min处理，得到目的核酸。

具体地，所述核酸释放试剂与待测样本的体积比为1:1～9。

具体地，所述待测样本包括全血、血清、血浆或分泌物。

具体地，所述目的核酸为DNA或RNA。

本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：采用本发明实施例提供的一种核酸释放试剂及核酸释放方法定量检测未知样本中的核酸含量时，其操作便捷，无需单独提取样本的核酸，只需将待测样本和所述核酸释放试剂在反应管中混匀，采用本发明实施例提供的核酸释放方法即可实现核酸的释放，免去了传统提取技术中的离心、弃上清和转管等操作，在很大程度上简化了实验步骤，减少了核酸的丢失，使检测灵敏度有了很大的提高。应用本发明实施例提供的核酸释放试剂可以对全血、血清、血浆或分泌物等未知样本中的核酸含量进行快速、准确的测定而且重复性好，特异性强。此外，本发明实施例提供的这种核酸释放试剂用量少、易于判别且成本较低、使用安全，适用于不同类型的PCR仪，可广泛应用于病原微生物的检测，基因突变的检测，法医学鉴定，组织和血液分型等领域。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1A是本发明实施例1提供的检测HBV-DNA的定量参考品A(10×10⁷IU/mL)、B(1.0×10⁶IU/mL)、C(1.0×10⁵IU/mL)和D(1.0×10⁴IU/mL)的荧光曲线图；

图1B是本发明实施例1提供的检测HBV-DNA的定量参考品的标准曲线图；

图2是本发明实施例1提供的检测HBV的阳性参考品和阴性参考品丙型肝炎病毒（HCV）和人类巨细胞病毒HCMV荧光曲线图；

图3是本发明实施例1提供的检测7个浓度梯度（1.0×10²IU/ml～1.0×10⁸IU/ml）的HBV阳性样本的荧光曲线图；

图4是本发明实施例2提供的检测HCV阳性样本的荧光曲线图；

图5是本发明实施例3提供的检测RV阳性样本的荧光曲线图；

图6是本发明实施例4提供的检测HPV阳性样本的荧光曲线图；