[发明专利]一种人类粪便DNA提取方法

权利要求书

1. 一种人类粪便DNA提取方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

步骤一.粪便样品的采集：

采集人排出的暴露不超过24小时的粪便样品，采用选择性样品采集，用无菌刀片刮下粪便样品的表层黏膜，分装到2ml离心管中；

步骤二.粪便样品的保存：

采用低温保存法，采集来的粪便样品，立即放于-20℃～-80℃保存；

步骤三.粪便样品的取样：

对于所保存的粪便样品，拿出置于冰上，用灭菌枪头或灭菌刀片挑取180～200mg的样本，置于冰上；

步骤四.样本的DNA提取：

(1).细胞裂解分离

在样本中加入1.2～1.6ml的粪便裂解液，置于常温条件下充分裂解混匀后离心分离，取上清液，加入200～300 mg牛血清白蛋白BSA去除杂质，离心分离得到上清液，在该上清液中加入20～40μl的浓度为20mg/ml的蛋白酶K置于58℃条件下消化反应1～6h，得到消化液；

所述的粪便裂解液由50mmol/L Tris-Cl、5mmol/L EDTA、1mmol/L NaCl和重量体积比为0.1%十二烷基硫酸钠SDS配制而成；

(2).沉淀

将上述步骤(1)所得的消化液冰浴冷却至常温，再加入200～400μl蛋白沉淀液沉淀蛋白，充分混匀后经离心分离去除蛋白杂质，得到离心后的上清液，该上清液为DNA抽提液；

(3).纯化

向已经去除蛋白杂质的DNA抽提液中加入硅胶膜结合液，DNA抽提液与硅胶膜结合液的体积比为1:1.5～1:2.5，然后经硅胶膜吸附，离心分离，得到沉淀物，在沉淀物中加入700～800μl硅胶膜洗涤液洗涤，重复洗涤两次，然后离心分离脱去硅胶膜中残存的硅胶膜洗涤液后，加入50～100μl TE缓冲液溶解洗脱DNA，离心分离得到离心后的上清液，该上清液为含DNA的保存液。

2.根据权利要求1所述的一种人类粪便DNA提取方法，其特征在于：DNA的提取无需经过磷酸盐缓冲液或者生理盐水浸泡、洗涤这些预处理过程，可直接迅速取180～200mg人的粪便样本置于冰上，进行DNA提取。

3.根据权利要求1所述的一种人类粪便DNA提取方法，其特征在于：所述的硅胶膜结合液为3mol/L盐酸胍。

4.根据权利要求1所述的一种人类粪便DNA提取方法，其特征在于：

所述的硅胶膜洗涤液由2mmol/L Tris-Cl、1mmol/L EDTA、5mmol/L NaCl和体积含量为50%的乙醇配制而成。

5.根据权利要求1所述的一种人类粪便DNA提取方法，其特征在于：

所述的蛋白沉淀液由2mol/L乙酸钾和体积含量为11.5%冰乙酸配制而成。