[发明专利]一种抗p21Ras蛋白的单链抗体KGH-R1-ScFv及其应用

说明书

技术领域

本发明属于医学生物学领域，尤其涉及一种抗p21Ras蛋白的单链抗体KGH-R1-ScFv及其应用。 

背景技术

肿瘤，尤其是恶性肿瘤，严重危害着人类的生命健康。开展恶性肿瘤的防治研究，对于预防肿瘤的发生、降低肿瘤发生率、减少死亡率、指导临床治疗等，都具有十分重要的现实意义。 

Ras基因是一种重要的原癌基因，参与多种肿瘤的发生与发展。其表达产物Ras蛋白作为重要的分子开关，参与细胞的增生、生长、分化、凋亡。研究表明，ras基因突变和（或）Ras蛋白过表达与肿瘤的发生与发展关系非常密切，在多种肿瘤的病变过程中起着非常重要的作用。因此，人们对Ras基因、Ras蛋白及其参与的信号转导通路进行了较为深入的研究。 

Ras基因是最早发现的原癌基因之一，最早发现于Harvery鼠肉瘤病毒和Kirsten鼠肉瘤病毒。Ras基因在进化中相对保守，广泛存在于各种真核生物中。哺乳动物的Ras基因家族有三个成员，即H-ras，K-ras，N-ras，在人染色体中，它们分别定位于11p14.1，12p12.1/12q24.2，1p13.2染色体上。Ras基因具有相似的结构，均由四个外显子组成，分布于全长约30kb的DNA上，编码由188-189个氨基酸组成的分子量为21KD的蛋白质，故称为p21Ras蛋白。 

p21Ras蛋白为膜结合型的GTP/GDP结合蛋白，定位于细胞膜内侧。p21Ras蛋白有较弱的GTP酶活性，与GTP和GDP有很强的亲和性。正常情况下，p21Ras与GDP结合并没有活性。当细胞外的生长分化因子把信号传导到胞膜内侧的p21Ras蛋白时，可增强p21Ras蛋白与GTP的结合活性，使p21Ras蛋白成为激活状态，信号系统开放。因为GTP酶活性的存在，p21Ras蛋白可使GTP水解成GDP，p21Ras蛋白成为失活状态，信号系统关闭。p21Ras蛋白和GDP结合后，可以激活鸟苷酸释放蛋白(GNRP)，GNRP使p21Ras蛋白释放GDP而结合GTP。因此，通过GTP和GDP的相互转换可以有节制地调节p21Ras蛋白对信号系统的开启和关闭，完成对细胞因子信号传导过程的调节。 

Ras原癌基因被激活后成为有致癌活性的癌基因。Ras基因激活的方式有3种：基因点突变、基因大量表达、基因插入和转位。Ras基因被激活后，其表达产物Ras蛋白的构型也发生改变，与GDP的结合能力减弱，与GTP结合后不需外界生长信号的刺激即可活化；同时Ras蛋白内在的GTP酶活性降低，导致Ras蛋白与GTP/GDP结合、调节的异常，活化状态的Ras蛋白持续地激活下游信号通路，导致细胞不可控制地增殖、恶变，同时细胞凋亡减少。 

随着分子生物学技术和基因工程技术的发展，肿瘤形成的生物学过程得到进一步阐明，肿瘤治疗的新的生物治疗模式被逐渐应用于临床并显示了良好的疗效。肿瘤生物治疗又分为肿瘤免疫治疗和肿瘤基因治疗。基因治疗是指将外源基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷、异常引起的疾病，达到治疗目的。随着细胞信号转导和抗体工程技术的发展，还诞生了细胞内抗体技术。细胞内抗体是指在细胞内表达并被定位于亚细胞区室（如胞核、胞浆或某些细胞器），与特定的靶分子作用（干扰或阻断靶分子的加工、分泌或功能）从而发挥其生物学功能的一类新的工程抗体。 

用于肿瘤生物治疗的完整抗体由于分子量较大，其血管通透性弱、扩散入肿瘤内能力差、半衰期长、免疫原性强，而限制了其靶向传递及肿瘤拮抗应用效果。细胞内抗体细胞内表达的特点提供了一种有效的拮抗p21Ras蛋白这类定位于细胞膜内侧的蛋白的方法。制备出一种细胞内抗体，能够在肿瘤细胞内表达抗p21Ras蛋白产物，阻断肿瘤细胞中p21Ras蛋白信号转导途径，限制肿瘤的生长和扩散，有望达到治疗Ras蛋白引起的各类肿瘤的目的。 

发明内容

本发明提供了一种抗p21Ras蛋白的单链抗体编码基因序列，以及该序列的应用。 

本发明的一种抗p21Ras蛋白的单链抗体KGH-R1-ScFv，其特征在于该抗体编码基因序列如SEQ ID NO1所示。 

SEQ ID NO1： 

>KGH-R1-ScFv (DNA)