[发明专利]检测Y染色体微缺失的实时荧光定量PCR试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测Y染色体微缺失的试剂盒及方法。

背景技术

据统计，全世界有15％的夫妇患有不育（孕）症，其中50％以上由男方所致。近年来研究表明30％以上的男性不育是由于遗传因素引起的生精障碍，通常表现为男性Y染色体长臂（q臂）11区上无精因子基因家族（Azoospermia factor，AZF）多个位点的缺失突变，其中任何一个座位的微缺失都可导致生精障碍，而对于因Y染色体微缺失引起的男性不育是无法治疗的。在胞质内单精子注射（ICSI）技术辅助生育治疗前检测Y染色体微缺失可以为临床治疗提供指导，减少不必要的经济浪费。目前欧洲、美国及我国相关学会已经建议将检测Y染色体微缺失列为男性不育的筛查项目。

目前检测基因微缺失的方法很多，最常用的PCR-RFLP法，另外还有反向点杂交法、等位基因特异性聚合酶链反应、直接测序法等。后者是所有方法的金标准，但由于其费用昂贵，未广泛使用。而PCR-RFLP法虽然费用较低，操作简单，但特异性和敏感性都不太理想，其检测通量小，对于样本量较大的临床检测不适用。

发明内容

本发明提供一种能够有效减少时间和成本的用于检测Y染色体微缺失的试剂盒及方法。

本发明提供一种用于检测Y染色体微缺失的实时荧光PCR试剂盒，包括盒体、PCR反应液及至少一个引物探针组合，所述引物探针组合选自用于检测SY84位点的SY84引物探针组合、用于检测SY86位点的SY86引物探针组合、用于检测SY127位点的SY127引物探针组合、用于检测SY134位点的SY134引物探针组合、用于检测SY254位点的SY254引物探针组合及用于检测SY255位点的SY255引物探针组合，其中，

SY84引物探针组合的上游引物如SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:8中之一所示，其下游引物如SEQ ID NO:9~SEQ ID NO:14中之一所示，其荧光探针如SEQ IDNO:15~SEQ ID NO:22中之一所示；

SY86引物探针组合的上游引物如SEQ ID NO:23~SEQ ID NO:28中之一所示，其下游引物如SEQ ID NO:29~SEQ ID NO:30中之一所示，其荧光探针如SEQ ID NO:31~SEQ ID NO:39中之一所示；

SY127引物探针组合的上游引物如SEQ ID NO:40~SEQ ID NO:51中之一所示，其下游引物如SEQ ID NO:52~SEQ ID NO:54中之一所示，其荧光探针如SEQ ID NO:55~SEQ ID NO:58中之一所示；

SY134引物探针组合的上游引物如SEQ ID NO:59~SEQ ID NO:61中之一所示，其下游引物如SEQ ID NO:62~SEQ ID NO:69中之一所示，其荧光探针如SEQ ID NO:70~SEQ ID NO:74中之一所示；

SY254引物探针组合的上游引物如SEQ ID NO:75~SEQ ID NO:76中之一所示，其下游引物如SEQ ID NO:77~SEQ ID NO:85中之一所示，其荧光探针如SEQ ID NO:86~SEQ ID NO:87中之一所示；

SY255引物探针组合的上游引物如SEQ ID NO:88~SEQ ID NO:90中之一所示，其下游引物如SEQ ID NO:91~SEQ ID NO:94中之一所示，其荧光探针如SEQ ID NO:95~SEQ ID NO:101中之一所示。

不同的引物探针组合用于检测Y染色体AZF区域的不同位点，可以根据需要选择检测其中的一个或多个位点，对应的，选择与该位点对应的引物探针组合。

Y染色体的AZF区域由AZFa区域、AZFb区域和AZFc区域组成。

所述试剂盒还包括用于检测男性性别决定基因SRY的SRY引物探针组合，所述SRY引物探针组合的上游引物如SEQ ID NO:102~SEQ ID NO:107中之一所示，其下游引物如SEQ ID NO:108~SEQ ID NO:109中之一所示，其荧光探针如SEQ ID NO:110~SEQ ID NO:112中之一所示。

SRY引物探针组合用于质控，其可以根据检测要求选择采用或不采用。