[发明专利]一种动物源性食品中残留庆大霉素的可视化蛋白芯片检测方法

权利要求书

1.一种动物源性食品中残留庆大霉素的可视化蛋白芯片检测方法，其特征在于，该方法依次顺序包括如下步骤：

(1)以牛血清白蛋白为空白对照，将牛血清白蛋白和庆大霉素-载体蛋白偶联物通过生物芯片点样仪进行点样操作，点样板孔内分别加入10~50μL的牛血清白蛋白和10~50μL的庆大霉素-载体蛋白偶联物，将点好的玻片放在4℃冰箱中固定过夜；

(2)固定后每个反应孔内加入10~100μL 1~50mg/mL的牛血清白蛋白缓冲溶液对芯片进行封闭1~3h，然后PBST洗涤3-4次，每次3-15min；

(3)在部分反应孔内加入10~100μL庆大霉素抗体和不同浓度的游离庆大霉素的标准溶液，在剩余反应孔内加入10~100μL庆大霉素抗体和样品溶液，所有反应孔20~37℃水浴反应1~3h，然后PBST洗涤3~4次，每次3~15min；

(4)在每个反应孔内加入10~100μL胶体金标记羊抗鼠IgG，20~37℃水浴反应1~3h，然后PBST洗涤3~4次，每次3~15min；

(5)在每个反应孔内加入10~100μL银增强显色剂，避光显色反应5~30min后，终止反应；

(6)用CCD平板扫描仪进行图像扫描，根据不同浓度的庆大霉素包被抗原的灰度值信号，利用外标曲线法定量检测样品中庆大霉素的含量。

2.根据权利要求1所述的动物源性食品中残留庆大霉素的可视化蛋白芯片检测方法，其特征在于，庆大霉素-载体蛋白偶联物按如下步骤制备得到：

(1)将1~500mg庆大霉素溶于1~100mL PBS缓冲液中，得到溶液I，在冰水浴中搅拌10~60min；

(2)将1~500mg碳二亚胺溶于1~100mLPBS缓冲液中，得到溶液II，在冰水浴中搅拌10~60min；

(3)称1~200mg载体蛋白溶于1~100mLPBS缓冲液中，得到溶液III，在冰水浴中搅拌10~60min；

(4)搅拌条件下将溶液I加入溶液III中，再在冰水浴下，将溶液II液逐滴加入上述混合液中，搅拌避光反应1h，4℃反应2~24h，得到庆大霉素-载体蛋白偶联物；

(5)将庆大霉素-载体蛋白偶联物放入透析袋中，用PBS缓冲液，4℃，透析1~3天，每8h换一次透析液。

(6)透析后的庆大霉素-载体蛋白偶联物进行紫外扫描，分析鉴定庆大霉素-载体蛋白偶联物及浓度测定，分装后于-20℃冰箱保存备用即得；

其中，所述的载体蛋白为匙孔血蓝蛋白、人血清白蛋白、牛血清白蛋白、牛丙种球蛋白、酶或卵清蛋白。

3.根据权利要求1所述的动物源性食品中残留庆大霉素的可视化蛋白芯片检测方法，其特征在于，牛血清白蛋白缓冲溶液，溶剂为PBS缓冲液。

4.根据权利要求1所述的动物源性食品中残留庆大霉素的可视化蛋白芯片检测方法，其特征在于，所述的银增强显色剂为Sigma-Aldrich公司的银增强试剂A和银增强试剂B按体积比1：1的混合液。

5.根据权利要求1所述的动物源性食品中残留庆大霉素的可视化蛋白芯片检测方法，其特征在于，样品溶液处理方法如下：对于液体样品，取50μL~1mL于10mL EP管中，用PBS缓冲液稀释10~100倍，用于分析；对于固体样品，取粉碎样品5g，加入8mL PBS缓冲液，混合5min，置50℃水浴下放置30min，室温3000r/min离心10min，取50μL上清液，加入450μLPBS缓冲液混匀，取50μL用于分析。