[发明专利]一种降低刺激的发酵烟叶提取物的制备方法及其在重组烟叶中的应用

权利要求书

1.一种植生拉乌尔菌，该菌株名为Raoultella planticola VP4-4，保藏号为CCTCC M 2012005，植生拉乌尔菌Raoultella planticola VP4-4 CCTCC M 2012005的生物学特征是：革兰氏阴性菌，能产酸、使牛奶液化并生成吲哚产生、赖氨酸脱羧酶实验呈阳性；鸟氨酸脱羧酶实验、H2S产生、明胶液化呈阴性；能以单糖，多糖、酯类和氨基酸为唯一碳源生长，其16S rRNA序列全长1408bp，其16S rRNA序列与Raoultella planticola的相似度达到99.563%。

2.一种降低刺激的发酵烟叶提取物的制备方法，包括以下步骤：

1）将烟叶粉碎至50~100目，再将烟末和水按质量比1∶20~60回流提取1~3h后过滤，重复1~3次回流提取滤液，合并滤液，即得烟叶提取液，并灭菌；

2）菌种活化：将植生拉乌尔菌 Raoultella planticola VP4-4 CCTCC M 2012005接种到斜面培养基上，在25~38℃，静置培养24~72h后得到活化菌种，置于冰箱中；

3）制备种子培养液：将步骤2）中所得的活化菌种，接种到种子培养基，在25~38℃条件下，100~150r/min振荡培养24h~72h，连续转接1~3次，制得种子培养液；

4）发酵：将种子培养液按体积比2~20%接种到上述步骤1）中的灭菌的烟叶提取液，接种后的烟叶提取液的装罐量为20~40%，pH5~8，温度30~40℃，转速100~200r/min，不避光条件下发酵3~7天，得到发酵液；

5）将发酵液和95%乙醇按体积比1∶2~6，沉淀过夜，4000~10000r/min离心10~30min，减压浓缩，过滤后减压浓缩至相对密度为1.0112~1.0633的浸膏，即得降低刺激的发酵烟叶提取物。

3.根据权利要求2所述的一种降低刺激的发酵烟叶提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤2）中，所述斜面培养基为：麦芽汁：120mL，

蔗糖：20g/L，琼脂：15g/L。

4.根据权利要求2所述的一种降低刺激的发酵烟叶提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤3）中，所述种子液培养基组成为：麦芽糖：50g/L，蛋白胨：10g/L，氯化钠：5g/L。

5.一种根据权利要求2所得降低刺激的发酵烟叶提取物的应用，其特征在于：所述降低刺激的发酵烟叶提取物浸膏加入卷烟中，加入卷烟中烟用发酵烟叶提取物的质量比为0.05~0.15%。