[发明专利]一种用于ELISA诊断的生物安全性非洲猪瘟抗原多因子血清

权利要求书

1.一种用于ELISA诊断的生物安全性非洲猪瘟抗原多因子血清,其特征在于，采用基因表达的结构蛋白P72、K205R、P54、A104R四种蛋白，经过化学纯化，用福氏不完全佐剂包被，分三批次肌肉免疫实验动物猪，一个月后采集猪血，分离血清，经过血清学检测，分装保存。

2.如权利要求1所述的用于ELISA诊断的生物安全性非洲猪瘟抗原多因子血清，其特征在于结构蛋白P72蛋白氨基酸序列如下：

1    vsvegtsgpl lcnihdlhkp hqskpiltde ndtqrtcsht npkflsqhfp enshniqtag

61   kqditpitda tyldirrnvh yscngpqtpk yyqpplalwi klrfwfnenv nlaipsvsip

121  fgerfitikl asqkdlvnef pg。

3.如权利要求1所述的用于ELISA诊断的生物安全性非洲猪瘟抗原多因子血清，其特征在于：结构蛋白K205R蛋白氨基酸序列如下：

1    mvepreqffq dllsavdqqm dtvkndikdi mkektsfmvs fenfierydtmekniqdlqn

61   kyeemaanlm tvmtdtkiql gaiiaqleil mingtplpak kttikeamplpssntnneqt

121  sppasgktse tpkknptnam fftrsewass ntfrekfltp eiqaildeqfanktgierlh

181  aeglymwrtq fsdeqkkmvk emmkk。

4.如权利要求1所述的用于ELISA诊断的生物安全性非洲猪瘟抗原多因子血清，其特征在于结构蛋白P54蛋白氨基酸序列如下： 

1    mdseffqpvy prhygeclss tptpsffsth mytiliaivv liiiiivliy lfssrkkkaa

61   aaieeediqf inpyqdqqwa gvppqpgiak pagattgsvs kpvmdrpitnnpvmdrpvtn

121  hpvtdrlvtd klgmatgepa aasapahsae pyttvttqnt asqtmsaienlrqrstythk

181  dlensl。

5.如权利要求1所述的用于ELISA诊断的生物安全性非洲猪瘟抗原多因子血清，其特征在于：结构蛋白A104R蛋白氨基酸序列如下：

1    mstkkkptit kqelyslvaa dtqlnkalie riftsqqkii qnalkhnqeviippgikftv

61   vtvkakparq ghnpatgepi qikakpehka vkiralkpvh dmln。

6.如权利要求1所述的用于ELISA诊断的生物安全性非洲猪瘟抗原多因子血清，其特征在于：阳性血清的使用方法：

1)通过棋盘法试验确定该阳性血清的最佳攻毒浓度;

2)将血清分装到ELISA试剂盒中，按照常规ELISA试验方法进行试验。

7.如权利要求1所述的用于ELISA诊断的生物安全性非洲猪瘟抗原多因子血清，其特征在于ELISA试验方法如下：

1)包被：抗原用0.05M pH9．6碳酸盐缓冲液作1：80稀释，加入酶标板，100μl/孔，4℃包被过夜;

2)封闭：酶标板用PBST洗三次后，加入含l％BSA的PBST封 闭液进行封闭，每孔100μl，37℃湿盒内反应lh；

3)加血清：每次ELISA试验均设立阳性对照和阴性对照，阳性对照孔加阳性血清，阴性对照孔加阴性血清。其它孔加检测血清样品，用血清稀释液对血清作l:20稀释后加入酶标板，每孔100ul，37℃湿盒内反应1h；

4)加酶标抗体：将酶标抗体(RHP一羊抗猪IgG)用PBsT作l：800稀释后加入酶标板，每孔100UI,37℃反应1h；

5)加底物液：每孔加底物反应液100μl，37℃避光反应15rnin；6)终止反应：加入2M H2SO4，每孔50μl，摇匀后测OD值。