[发明专利]一株枯草芽孢杆菌及其应用在审
申请号: | 201210328716.5 | 申请日: | 2012-09-07 |
公开(公告)号: | CN102816725A | 公开(公告)日: | 2012-12-12 |
发明(设计)人: | 刘永锋;陈志谊;于俊杰;刘邮洲;聂亚锋 | 申请(专利权)人: | 江苏省农业科学院 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;A01N63/00;A01P3/00;A01P1/00;C05F11/08;C12R1/125 |
代理公司: | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人: | 程化铭 |
地址: | 210014*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 枯草 芽孢 杆菌 及其 应用 | ||
技术领域
本发明涉及一株枯草芽孢杆菌及其应用,属于微生物领域。
背景技术
目前,植物病害防治主要依赖化学农药,化学农药在农产品的安全生产中做出了巨大贡献,但化学农药普遍使用和农药用量的增加产生了一系列问题,如病原菌产生抗药性、农产品农药残留超标,农田生态环境污染等问题。这些问题增加了农田生产成本,同时也使本身具有优良品质的农产品因农药的过度使用而受影响。新的防治技术和病害防治手段成为植保科技工作者探索的方向,其中利用枯草芽孢杆菌防治植物病害成为研究热点。枯草芽孢杆菌是一种有益的土壤细菌,具有发达的分泌系统和较强的环境适应性,在农业生产中广泛应用。枯草芽孢杆菌对多种病原菌具有拮抗性能,生产中用于防治多种植物病害。例如用来防治芒果软腐病、辣椒炭疽病、苹果轮纹病、水稻纹枯病、水稻白叶枯病和一些镰刀菌引起的病害,相关研究比较深入,取得了显著的研究进展。
以水稻为例,受到多种病原菌的危害。植物病害水稻是我省主要的粮食作物,优质稻米在我省种植面积有扩大的趋势,其中以粳稻类品种所占面积甚大,这些密植、大穗型、优质和高产稻米为病虫害的发生提供了充裕的营养和繁殖条件。近年来我省水稻主要病害的发生呈现上升趋势。稻瘟病在全省范围内均有发生。生产上,水稻稻瘟病的防治主要以三环唑、多菌灵、还有一些以有机磷为主的化学农药为主,有机磷类的农药在高温时施药容易造成人畜中毒。江苏省水稻稻瘟病的防治采取的是预防为主的防治思路,分别在苗期和孕穗期进行防治,大量农药的投入,给农民造成了较大的经济负担,同时也对稻米的品质和稻田生态环境造成了不良影响。江苏省水稻稻瘟病的防治面积大约在7000万亩左右(次/年),仅每年在防治水稻稻瘟病上的开支在1.75亿元人民币,给农民造成了较大的经济负担,病害的发生和大量化学农药的使用严重的影响了稻米品质。
江苏省抗白叶枯病育种已经缺乏有效的抗病基因,水稻白叶枯病在我省的淮安地区、宿迁地区和连云港均有发生。江苏省的气候特点适宜水稻白叶枯病菌的发生,前水稻白叶枯病防治相对较难,没有特效药剂,主要利用农用链霉素、叶菌灵、叶枯宁、消病灵、菌毒清和拌种灵等杀菌剂用来防治。农用抗菌素的使用目前也受到许多争议。
保障无公害、优质农产品的供给和实现资源的可持续利用是本世纪我国农业生产面临的最大挑战。但是,化学农药的预防性过度使用,尤其在孕穗期使用,对稻米品质造成潜在的影响。利用生物防治技术防治水稻稻瘟病和白叶枯病,国内外均有相关研究,但未见开发出相对成熟的产品应用于生产。
通过引进枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)控制植物病害的流行是目前植病生防研究中十分活跃的研究领域。美国已有四株枯草芽孢杆菌经环保局(EPA)批准进入商品化或有限商品化应用,如GBO3、MBI600、QST7。陈志谊,许志刚,刘永锋等开发了新型的微生物杀菌剂“纹曲宁”,说明利用枯草芽孢杆菌防治植物病害切实可行。
发明内容
本发明的目的在于提供一株枯草芽孢杆菌,它可以作为生物农药防治植物多种病害,也可以作为生物肥料促进作物增产。
本发明的目的是通过下列技术措施实现的:本发明枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) T-500是从南京50份水稻田土壤样品中分离获得,已于2012年5月2日被中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 CGMCC受理保藏,保藏编号为:CGMCC NO:6058 ,拉丁学名为Bacillus subtilis T-500。其生物学性状记载为:T-500在YPGA培养基平板上生长24h的菌落4-5mm,菌落圆形,四周光滑,米色,表面有皱褶。革兰氏反应阳性,细胞形状为杆状,细胞直径大于1μm,严格好气,L-阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、甘露醇、淀粉水解、明胶液化等利用反应均为阳性。
本发明枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) T-500的培养方法,包括如下步骤:
1)、菌株活化:将枯草芽孢杆菌T500移入YPGA斜面培养基上,在28-32℃下培养24~72h;
2)、种子培养:将步骤1)活化后的菌株,移入YPG培养液中, 120转/分,28-32℃下培养24~72h;
3)、发酵培养:将步骤2)中种子罐中的发酵液压入发酵罐发酵,发酵温度为28-32℃;转速:适当;酸碱度7.0-7.4,待到菌体有90%变为芽孢后,检测菌含量达到2×1010cfu/ml时出罐。
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