[发明专利]一种液固双重发酵制备高密度微生态制剂的方法

权利要求书

1.一种液固双重发酵制备高密度微生态制剂的方法，其特征在于包括液体菌液的培养、固体基料的配制和固体基料与液体菌液的混匀三个功能性过程，其具体工艺步骤包括：

（1）平板培养：枯草保存菌种划线接种至平板培养基，其培养基配料为大豆蛋白胨3g，NaCl20g，葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g，胰蛋白胨17g，琼脂15g，蒸馏水1000ml，pH值为7，121℃灭菌，37℃培养24h；

（2）试管接种：取生长良好、菌落典型的菌株接种10ml，其培养基配料为大豆蛋白胨3g，NaCl20g，葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g，胰蛋白胨17g，琼脂15g，蒸馏水1000ml，pH值为7，121℃灭菌，37℃培养40h；

（3）三角瓶接种100ml，其培养基同步骤（2），121℃灭菌，37℃培养36h；

（4）三角瓶接种1000ml，其培养基同步骤（3）；

（5）10L种子发酵罐，培养液7.5L，培养基同步骤（3），pH值为7，121℃灭菌30分钟，培养温度为37℃，时间为24h，转速150r/min，通气量0.4vvm，指每分钟通入单位发酵体积m³的空气体积m³；

（6）100L种子发酵罐，培养液75L，培养基按葡萄糖1.5g，豆粕粉3g，淀粉1g，30.8mg/L的硫酸锰1g，磷酸氢二钾3g，磷酸二氢钾1.5g，硫酸镁0.5g,酵母膏0.2g，氯化钠20g，水1000ml的比例配制，按步骤（5）方法培养；

（7）2000L发酵罐，培养液为1500L，培养基同步骤（6），发酵方法同步骤（5），培养36h；得发酵液

（8）选择固体基质为豆粕粉1000kg，蒸煮灭菌，待冷却至35℃时，加入步骤（7）中的发酵液900kg，固体基质重量与液体发酵液重量比为1：1，搅拌均匀后装盘，入无菌培养室，恒温40℃，通风，浅盘发酵36小时，中间翻料3次，发酵结束后提高温度至60℃，加大风量，干燥，粉碎即得产品高密度微生态制剂。