[发明专利]表达巢蛋白的肾源干细胞或祖细胞

权利要求书

1.一种分离肾源干细胞或祖细胞的方法，其中所述细胞表达巢蛋白，所述方法包括：

提供一种以C57BL/6为遗传背景的巢蛋白-绿色荧光蛋白转基因小鼠模型；

饲养所述转基因小鼠模型的小鼠至1周龄或以上，分离小鼠肾，用胶原酶IV和胰蛋白酶消化，过滤消化后的细胞悬液，筛除肾结缔组织、肾小管和细胞团块，获得单个细胞，所述细胞产生受巢蛋白增强子控制的增强型绿色荧光蛋白；

将上述单个细胞通过流式细胞仪进行分选，用C57B/6小鼠细胞做阴性对照细胞，收集表达绿色荧光蛋白的荧光强度是阴性对照细胞的荧光强度的10倍或以上的细胞，从而分离出所述表达巢蛋白的肾源干细胞或祖细胞。

2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述巢蛋白-绿色荧光蛋白转基因小鼠模型包含以巢蛋白启动子驱动表达增强型绿色荧光蛋白的质粒，其中，包括上游翻译位点的启动子区域长2.5kb，包含第二个外显子3’到第三个内含子5’的增强子区域长1.8kb，多聚腺苷化位点与增强型绿色荧光蛋白cDNA连接。

3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：进一步包括在培养基中培养所述分离的肾源干细胞或祖细胞以致产生自我更新和增殖的细胞。

4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的培养基为无血清培养基，其成分包括：DMEM/F12 基础培养基、10×浓度的1%（v/v）N-2添加物、5×浓度的2%（v/v）B27 增殖添加物、25ng/ml纯化EGF、40ng/ml牛重组bFGF和10U/ml青霉素/链霉素。

5. 根据权利要求1所述的方法分离的肾源干细胞或祖细胞，所述细胞表达巢蛋白。

6. 根据权利要求5所述的肾源干细胞或祖细胞进一步在培养基中培养获得的自我更新和增殖的细胞。

7. 根据权利要求6所述的细胞，其特征在于，所述的培养基为无血清培养基，其成分包括：DMEM/F12 基础培养基、10×浓度的1%（v/v）N-2添加物、5×浓度的2%（v/v）B27 增殖添加物、25ng/ml纯化EGF、40ng/ml牛重组bFGF和10U/ml青霉素/链霉素。

8. 根据权利要求5所述的分离的肾源干细胞或祖细胞在制备治疗肾损伤修复的组合物中的用途。

9. 根据权利要求6所述的细胞在制备治疗肾损伤修复的组合物中的用途。