[发明专利]一种用于组织细胞基因组DNA的核酸吸附快速分离方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域中组织细胞基因组DNA分离方法，具体涉及一种用于组织细胞基因组DNA分离试剂及核酸吸附离心套管，采用该核酸吸附分离方法，能快速分离出组织细胞基因组DNA，分离出的DNA产量和纯度高，无蛋白质及RNA污染。

背景技术

目前，国内外提取组织细胞中基因组DNA，利用蛋白酶消化后采用有机溶剂抽提的方法。该方法实验周期长、操作繁琐，提取的基因组DNA纯度和产量不高，常含有蛋白质和RNA的污染，直接影响下游实验工作。

发明内容

针对上实验方法存在的缺陷或不足，本发明的目的在于，提供一种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，该方法能快速分离组织细胞中基因组DNA，其分离的DNA纯度和产量高、无蛋白质及RNA污染。

为了实现上述任务，本发明采用如下的技术解决方案：

一种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，其特征在于，该方法采用核酸吸附离心套管，用DNA提取试剂从匀浆后的组织或消化后的细胞中快速分离DNA，所述的DNA提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液、分离溶液组成，具体操作过程是：

收集经匀浆后的组织或消化后的细胞，加悬浮溶液悬浮，然后用离解溶液将基因组DNA从组织或细胞中离解出来，通过核酸吸附管中吸附层的吸附，用清除溶液清除蛋白质及其他杂质，再用洗涤溶液清洗，最后用分离溶液使DNA与核酸吸附层脱离，从而获得超纯的DNA；

所述的DNA提取试剂各组分及物质浓度（摩尔/升）组成按终浓度体积为：

悬浮溶液：0.01-0.2mol/L C₄H₁₁NO₃,0.001-0.5mol/L EDTA，0.0001-0.9mol/L C₁₅H₂₈NaNO₃，余量为去离子水；

离解溶液：0.5-10mol/L胍盐，余量为去离子水；

清除溶液：0.1-10mol/L胍盐，0.01-4mol/L C₄H₁₁NO₃,余量为乙醇和去离子水的混合溶液（2:1，v/v）；

洗涤溶液：0.01-8mol/L NaCl，0.001-3mol/L C₄H₁₁NO₃，余量为乙醇和去离子水的混合溶液（2:1，v/v）；

分离溶液：0.01-10mol/L EDTA，0.001-0.6mol/L C₄H₁₁NO₃，余量为去离子水。

所述核酸吸附离心套管包括内层吸附管和外层收集管，其中，内层吸附管中含吸附介质层，外层套管为液体收集管，使用时将内层吸附管插入到外层收集管中。

本发明的用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，操作简便，耗时短，提取的基因组DNA纯度高，无蛋白质及RNA污染。显示其较传统提取血液DNA方法的优势，更体现出具有普及临床对疾病诊断和研究的应用价值。

附图说明

图1是实验流程图

下面结合附图和实施例对发明进一步详细说明。

具体实施方式

按照本发明的技术方案，本发明的用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，采用核酸提取试剂和核酸吸附离心套管。其中，核酸提取试剂包含：悬浮溶液，离解溶液，清除溶液，洗涤溶液和分离溶液。

所述的核酸提取试剂中，离解溶液的作用是使基因组DNA从组织或细胞中离解出来，通过核酸吸附管中吸附层的吸附，用清除溶液清除蛋白质及其他杂质，再用洗涤溶液清洗，最后用分离溶液使DNA与核酸吸附层脱离，从而获得超纯的DNA。

DNA提取试剂各组分及物质浓度（摩尔/升）组成按终浓度体积为：

悬浮溶液：0.01-0.2mol/L C₄H₁₁NO₃,0.001-0.5mol/L EDTA，0.0001-0.9mol/L C₁₅H₂₈NaNO₃，余量为去离子水；

离解溶液：0.5-10mol/L胍盐，余量为去离子水；