[发明专利]一种叶酸修饰壳聚糖包裹质粒纳米粒子及其制备方法

权利要求书

1.一种叶酸修饰的壳聚糖包裹质粒纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将脱乙酰度大于95%的壳聚糖粉末溶解在含1%的醋酸溶液中，制备成5mg/mL的壳聚糖溶液，并调节pH值至4.9-5.2；在持续匀速搅拌作用下，将2mg/mL的三聚磷酸钠溶液按照1.0:(1.2-2.0)的体积比逐滴滴入所述壳聚糖溶液中，形成物理交联后的壳聚糖溶液；

S2、在持续匀速搅拌作用下，将5wt%的戊二醛溶液按照1:12-15的体积比逐滴加入到所述物理交联后的壳聚糖溶液中，37°C水浴震荡过夜，得到化学交联后的壳聚糖溶液，并加入过量的NaBH₄粉末；

S3、对步骤S2制得的壳聚糖溶液进行透析纯化，得到壳聚糖纳米粒子悬浮液；

S4、用磷酸缓冲液将叶酸配成5mg/ml的叶酸溶液；将所述叶酸溶液、壳聚糖纳米粒子悬浮液以及1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐按质量比为10:1:5混合，在匀速搅拌作用下，室温反应30min；透析去除未反应的叶酸，得到叶酸修饰的壳聚糖纳米粒子悬浮液；

S5、将IP10质粒用25mmol/L的Na₂SO₄溶液稀释至1mg/ml后与所述壳聚糖纳米粒子悬浮液分别置于55°C水浴5-20min，按质量比为10:1迅速混合后，在涡轮振荡器上以2000rpm的震荡速率震荡30-50秒，室温下静置30min；并在4°C下>10,000g离心20min，然后用磷酸缓冲液重悬，形成乳白色悬液，制得叶酸修饰的壳聚糖包裹质粒纳米粒子。

2.根据权利要求1所述的叶酸修饰的壳聚糖包裹质粒纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中用1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至4.9-5.2，所述持续匀速搅拌为500rpm，所述逐滴滴入为1滴/秒的速率。

3.根据权利要求1所述的叶酸修饰的壳聚糖包裹质粒纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中所述水浴震荡的震荡速率为120rpm。

4.根据权利要求1所述的叶酸修饰的壳聚糖包裹质粒纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中透析纯化使用的透析袋的截留分子量为8000-14000，透析时间为2小时。

5.根据权利要求1所述的叶酸修饰的壳聚糖包裹质粒纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中所述匀速搅拌的速度为200rpm；所述透析去除未反应的叶酸使用截留分子量为8000-14000的透析袋。

6.一种叶酸修饰的壳聚糖包裹质粒纳米粒子，其特征在于，采用权利要求1-5中任意一项所述的制备方法制得。