[发明专利]一种米根霉脂肪酶的表面展示系统及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201210333817.1 | 申请日： | 2012-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN102876594A | 公开（公告）日： | 2013-01-16 |
| 发明（设计）人： | 王飞;王烨;李迅 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N11/16;C12N15/81;C12N9/20;C12R1/84;C12R1/845 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 邱兴天 |
| 地址： | 210037 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 米根霉 脂肪酶 表面 展示 系统 及其 制备 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种米根霉脂肪酶的表面展示系统，其特征在于：将米根霉脂肪酶ProROL基因连接于锚定蛋白Pir1p基因的C端，形成融合蛋白，以Pir1p的N端重复序列为锚定区域，将融合蛋白通过共价键方式固定于表达菌株表面，即为表面展示系统。
2.根据权利要求1所述的米根霉脂肪酶的表面展示系统，其特征在于：所述的表达菌株为巴斯德毕赤酵母KM71H。
3.一种构建权利要求1所述的米根霉脂肪酶的表面展示系统的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将锚定蛋白基因mpir1克隆到表达载体中，得到以mpir1为锚定蛋白的表面展示表达载体；
（2）将米根霉脂肪酶基因克隆到步骤（1）的表面展示表达载体的mpir1下游，形成融合基因；
（3）将融合基因转化巴斯德毕赤酵母，筛选阳性转化子，即得到表面展示系统。
4.根据权利要求3所述的构建表面展示米根霉脂肪酶重组酵母的方法，其特征在于：所述表达载体为带有分泌信号肽序列的巴斯德毕赤酵母表达载体。
5.根据权利要求3或4所述的构建表面展示米根霉脂肪酶重组酵母的方法，其特征在于：所述表达载体为pPICZαA或pGAPZαA。
6.根据权利要求3所述的构建表面展示米根霉脂肪酶重组酵母的方法，其特征在于：所述巴斯德毕赤酵母为巴斯德毕赤酵母KM71H。
7.权利要求1所述的米根霉脂肪酶的表面展示系统在表达米根霉脂肪酶中的应用。
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