[发明专利]一种生产产乳酸枯草芽孢杆菌合生元饲料添加剂用菌液的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物领域，特别涉及产乳酸枯草芽孢杆菌的培养方法。

背景技术

随着国民经济的快速发展和人民生活水平的日益提高，人们对养殖环境及安全、健康的动物产品提出了更高、更新的要求。而近些年来，频频曝光的动物食品安全事件，如“瘦肉精事件”、“三聚氰胺奶事件”等等，无一不对动物养殖业造成了沉重地打击，引发了严重的信任危机。中国作为世界第一动物养殖大国，动物产品出口在国民经济中举足轻重，但近年来欧洲、日本等一些国家以食品安全问题为壁垒，拒绝中国动物产品的部分进入，给我国经济造成不应有的损失。这一系列的问题都是“动物产品安全”问题所致，已成为制约中国养殖业科学健康和可持续发展的瓶颈。

国际上目前普遍认为，微生态制剂在未来的动物养殖中将有巨大的应用前景，对解决动物产品安全性将起到较大的作用。

我国虽然在微生态制剂的研究和开发方面比欧美起步晚，但近20年来发展相当迅速。生产微生态制剂的厂家由2000年的十几家发展到2004年的1600家。据不完全统计，到2004年止，我国的各种微生态制剂的产量已达到15万吨。产业化程度高、规模较大的有四川何明清用芽孢杆菌研制的8501、8701、8801、8901、901系列，分别用于仔猪、育肥猪、鱼、禽、肉鸡。大连医学院研制剂的“促菌生”，南京农大研的“促康生”，松江制药厂生产的DM423菌粉，黑龙江兽医研究所生产的“痢康粉剂”，北京营养研究所生产的“增菌素”，杭州商学院生产的乳酸菌复合剂等等。市场上应用较多、效果较好的大多是以芽孢杆菌和乳酸杆菌为主的复合益生菌口服制剂。对产乳酸枯草芽孢杆菌进行发酵生产，综合枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌的优点，可以使微生态制剂性能得到质的飞跃，达到更新换代的目的。大规模发酵生产乳酸枯草芽孢杆菌菌液是新型微生态制剂生产的基础和关键之一，但目前未有工厂化大规模发酵生产乳酸枯草芽孢杆菌菌液的发酵工艺。

发明内容

本发明的目的在于提供一种培养基配方、培养基制备方法及其获得的培养基，该配方及培养基成本低，取材方便，适用于产乳酸枯草芽孢杆菌的培养；该培养基的制备方法简单，适用于大规模制备。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

产乳酸枯草芽孢杆菌的培养基配方，按重量份计具体由以下组分组成：蛋白胨1-5份，牛肉膏1-3份，酵母提取物1-10份，氯化钠5-15份，果寡糖10-100份。

进一步，产乳酸枯草芽孢杆菌的培养基配方，按重量份计具体由以下组分组成：蛋白胨3份，牛肉膏2份，酵母提取物7份，氯化钠11份，果寡糖75份。果寡糖，又称为果聚糖、低聚果糖、藤果三糖族低聚糖，分子式为G-F-Fn(其中G为葡萄糖，F为果糖，n＝13)。

所述的培养基配方制备培养基的方法，取配方量的蛋白胨、牛肉膏、酵母提取物及氯化钠，加入适量的水使蛋白胨的质量体积分数为1-5g/L，并使各组分充分溶解，得混合液体；将所述混合液体灭菌，加入配方量的果寡糖混合均匀，得培养基。

所述的方法制备的培养基。该培养基为产乳酸枯草芽孢杆菌的专用培养基，在特定的发酵条件下，可得到较好的发酵效果。

本发明的目的之二在于提供生产产乳酸枯草芽孢杆菌合生元饲料添加剂用菌液的方法，该方法操作简单，稳定性高，产率高。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

所述的培养基生产产乳酸枯草芽孢杆菌合生元饲料添加剂用菌液的方法，具体包括以下步骤：将生产产乳酸枯草芽孢杆菌种子液接种到装有所述培养基的发酵罐中进行动态发酵，动态发酵条件为：30-37℃条件下连续培养24-72小时，通气量为0.1-0.5V/V·min，静置培养96-120小时，得产乳酸枯草芽孢杆菌合生元饲料添加剂用菌液。

进一步，所述动态发酵条件为在2-20转/分钟条件下动态搅拌发酵。

作为优选，所述种子液和培养基的体积比为1-4∶10，所述发酵罐的装液量为10-20ml/100mL，所述种子液的浓度为3-15×10⁸cfu/mL，发酵罐的装液量优选为20mL/100mL。

其中，所述种子液为二级种子液。

其中，所述二级种子液的获得方法具体包括以下步骤：

A一级种子液的获得