[发明专利]一种检测传染性喉气管炎病毒的液相芯片方法有效
| 申请号： | 201210337807.5 | 申请日： | 2012-09-12 |
| 公开（公告）号： | CN102851395A | 公开（公告）日： | 2013-01-02 |
| 发明（设计）人： | 王慧煜;韩雪清;林祥梅;梅琳;李志辉 | 申请（专利权）人： | 中国检验检疫科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C40B40/06;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飞;张庆敏 |
| 地址： | 100123 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 传染性 气管炎 病毒 芯片 方法 | ||
1.一种检测传染性喉气管炎病毒的引物，其核苷酸序列为：
ILTV-F:5’-AAAACTTGAATGTCGGGAGG-3’，
ILTV-R:5’-ATGTTGGAGTGTGTTGGAATGTCA-3’，在ILTV-R引物的5’端用生物素标记。
2.一种与权利要求1所述引物配合使用的检测传染性喉气管炎病毒的探针，其核苷酸序列为：
5’-GCCCCACTAAGAATAATGAACCACG-3’，在其5’端用氨基修饰。
3.一种用于检测传染性喉气管炎病毒的液相芯片，其特征在于，是权利要求2所述的检测探针与荧光标记微球偶联制成的特异性检测微球。
4.如权利要求3所述的液相芯片，其特征在于，每6.25×105个荧光微球加入浓度为0.1nmol/μL的探针2μL。
5.一种用于检测传染性喉气管炎病毒的液相芯片检测试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的引物和权利要求3或4所述的液相芯片。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其中权利要求1所述的引物进行PCR扩增的25μL工作体系为：10×buffer 2.5μL，10mmol/L dNTP2.0μL，taq DNA聚合酶0.5μL，DNA模板2.0μL，10μmol/L上游引物ILTV-F 0.5μL，10μmol/L下游引物ILTV-R 1.0μL，不含RNA酶的ddH2O 16.5μL。
7.如权利要求5所述的试剂盒，其中权利要求1所述的引物进行PCR扩增的工作条件为：95℃预变性5min；94℃变性40s，58℃退火40s，72℃延伸40s，共35个循环；72℃延伸10min。
8.如权利要求5所述的试剂盒，其中权利要求1所述的引物的PCR扩增产物与液相芯片杂交的工作条件为：95℃变性5min后，54℃杂交30min。
9.权利要求1所述的引物在制备传染性喉气管炎病毒液相芯片检测试剂盒中的应用。
10.权利要求2所述的探针在制备传染性喉气管炎病毒液相芯片检测试剂盒中的应用。
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