[发明专利]鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，本发明涉及一种鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer，RA )感染是鸭、鹅、火鸡等多种鸟类的一种高致病性、接触传染性疾病。本病以10-35日龄的雏鸭发病较多，发病率最高可达90% 以上，死亡率为5%-75%，是影响养鸭业的重大传染病之一。

RA 血清型众多，目前世界范围内已确定的有21种，各血清型之间的交叉保护作用差。研究表明我国RA感染流行菌株的优势血清型是1、2和10型，目前国内可用于预防RA感染的疫苗为鸭传染性浆膜炎灭活油乳剂疫苗，为预防单一血清1型鸭疫里默氏杆菌感染的疫苗，对国内经常发生的血清2型和10型鸭疫里默氏杆菌感染无预防保护作用。由于细菌培养基等因素的限制使得培养的菌数很难达到制备三价灭活疫苗的菌数要求，迄今尚无包括血清1型、2型和10型鸭疫里默氏杆菌在内的RA三价灭活疫苗的研究报道或商品化疫苗。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗及其制备方法。本发明提供的鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗可用于预防血清1型、血清2型和血清10型鸭疫里默氏杆菌感染。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗，所述鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗包含鸭疫里默氏杆菌血清1型灭活全菌、血清2型灭活全菌和血清10型灭活全菌以及佐剂。

本发明的另一方面，所述鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗的菌株为血清1型CH3株、血清2型NJ3株和血清10型HXb2株。

本发明的另一方面，所述鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗中，灭活CH3株、NJ3株和HXb2株的抗原含量分别都大于等于4×10⁹ CFU/mL、2×10⁹ CFU/mL 和2×10⁹ CFU/mL。

本发明的另一方面，所述鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗中血清1型、2型、10型抗原与佐剂的混合重量比例为1：1：1：7。

本发明的另一方面，所述鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗是灭活全菌疫苗。

本发明的另一方面，所述鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗佐剂为白油佐剂或者Montanide ISA 70 VG佐剂。

本发明的另一实施方面，一种鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗的制备方法包括下列步骤：

（1）所述鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗各组成菌株灭活抗原的制备：取血清1、2和10型鸭疫里默氏杆菌制苗用菌株CH3、NJ3和HXb2分别接种到TSB中复苏后划线接种于TSA平板上，置适温培养箱中培养过夜,肉眼观察，挑选呈奶油状、微蓝色半透明的特征单菌落分别进行一级和二级种子繁殖后，培养至对数生长期进行细菌的大量繁殖，经纯度检验和细菌计数后加入福尔马林，适宜温度下振荡后进行灭活；分别取各灭活菌液少量接种于TSA平板适温培养过夜，进行无菌检验,应无细菌生长；

（2）所述鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗各组分的配制与疫苗乳化,根据细菌计数结果，分别将CH3、NJ3或HXb2灭活菌液稀释或浓缩；取各灭活菌液混匀，加入Montanide ISA 70 VG佐剂于搅拌机低速搅拌后，高速搅拌乳化1分钟/次，2次以上，即为鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗。

本发明的另一方面，一种鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗的制备方法包括下列步骤：

（1）所述鸭疫里默氏杆菌三价灭活疫苗各组成菌株灭活抗原的制备，取-80 ℃保存的血清1、2、10型RA制苗用菌株CH3、NJ3、HXb2分别接种到TSB中复苏后划线接种于TSA平板上，置5% CO₂培养箱中37℃培养24小时。肉眼观察，挑选呈奶油状、微蓝色半透明的特征单菌落分别进行一级和二级种子繁殖后，在通气量1.0 SLPM, 转速400rpm，培养基PH值7.4，接种量为体积比5%的条件下培养至对数生长期进行细菌的大量繁殖，经纯度检验和细菌计数后加入体积比0.4 %福尔马林，37℃ 200 rpm振荡15小时进行灭活；分别取各灭活菌液少量接种于TSA平板37 ℃ 5% CO₂培养24 h，进行无菌检验。应无细菌生长。