[发明专利]检测调钙素水平的ELISA试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测试剂，特别是一种检测肝损伤患者血清中调钙素水平的ELISA试剂盒及方法。

背景技术

肝炎是严重威胁我国广大人民群众健康的最主要传染病之一。肝炎是各种原因损伤肝脏的共同后果，尤以各种病毒性感染、药物性损伤、酒精性损伤等因素多见。在我国，肝脏炎症又以HBV感染所致炎症为主。HBV和HCV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌，是重要的疾病死亡原因之一。

目前，临床上广泛应用的肝脏炎症血清学指标主要是谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）。然而，在长期的临床实践中，医生发现血清转氨酶水平与肝脏炎症程度常常不一致，具有很大的局限性。临床医生常需要对患者进行肝活检病理组织学检查，来确定肝脏炎症的真实情况。肝活检是确诊肝脏炎性损伤性质和程度的金标准，但其为创伤性检查，价格昂贵，患者不愿接受，并且由于难以重复进行，不适合作为诊断和疗效判断的常规手段。因此，临床上迫切需要其他更灵敏准确的血清学指标来进行辅助诊断，弥补转氨酶的不足。

1978年，Yamaguchi等人发现在肝脏组织中存在一种钙离子结合蛋白，通过调节细胞内的Ca²⁺信号传导物来调节肝细胞的功能，命名为调钙素（regucalcin）。1992年，Fujita等人用二维电泳的方法检测大鼠肝可溶性蛋白与年龄的关系时发现了一种新的蛋白，其表达可以独立减少衰老细胞中雄激素的合成，其分子量在30KD左右，故命名为衰老标志蛋白30（Senescence Marker Protein-30，SMP30）。1993年，Shimokawa N和Yamaguchi报道了一种编码蛋白质的cDNA，证实调钙素与SMP30为同一种蛋白。

在生理情况下，调钙素mRNA主要在肝脏细胞和肾皮质细胞中大量表达，在心脏、脑、骨骼和一些其他组织细胞中也有少量表达。在肝脏，调钙素大量存在于肝细胞胞浆，占肝脏可溶性蛋白总量的2%。调钙素可以在多种组织细胞的胞浆和胞核发挥重要生理作用。除了调节细胞内钙稳态，还具有抑制蛋白酪氨酸磷酸酶、蛋白丝氨酸和（或）苏氨酸磷酸酶的作用，从而影响蛋白质磷酸化、去磷酸化这一重要的修饰过程。此外，调钙素还具有抑制细胞增殖的作用。2010年，Chakraborti首次测定了调钙素的晶体结构，证实人类调钙素蛋白的一级晶体结构上只有一个金属离子结合位点，可以结合二价离子包括Zn²⁺、Ca²⁺、Mn²⁺或Mg²⁺，该晶体结构本身更倾向于结合Zn²⁺，增强酶活性；在外界作用条件下，调钙素蛋白可能会结合更多Ca²⁺从而促进钙聚集。

调钙素基因及其蛋白质表达异常参与了多种疾病的发病过程，如高血压病、肾脏病等。由于调钙素能够释放入血，其血清学水平可能在一定程度上反映肝组织的损伤。但具体如何反映尚不清楚，血清中调钙素水平的变化与肝组织学表达的关系还需要进一步研究。

临床上广泛应用的肝脏炎症血清学指标主要是谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST），它们也是判断疗效的主要指标。此外，对于HBV感染者，ALT和AST同时也是最常用的抗病毒治疗的指征。然而，在长期的临床实践中，医生发现血清转氨酶水平与肝脏炎症程度常常不一致。在转氨酶正常的慢性无症状HBV感染者中，肝组织完全正常的仅占极少数，大约90％左右的感染者有不同程度的肝组织炎症及纤维化。在重型肝炎患者中，常常出现“酶胆分离”现象，即总胆红素越来越高，而ALT和AST则趋于下降，因此转氨酶更不能准确反映重型肝炎肝损伤的程度。综上所述，ALT和AST作为目前主要的肝脏炎症指标，其意义具有很大的局限性。基于这一点共识，临床医生常常需要对患者进行肝活检病理组织学检查，来确定肝脏炎症的真实情况。肝活检是确诊肝脏炎性损伤性质和程度的金标准，但其为创伤性检查，价格昂贵，患者不愿接受，并且由于难以重复进行，不适合作为诊断和疗效判断的常规手段。因此，临床上迫切需要其他更灵敏准确的血清学指标来进行辅助诊断，弥补转氨酶的不足。