[发明专利]一种产酯酶肠杆菌、其酯酶和基因及其在制备紫杉醇手性前体中的应用

权利要求书

1.一种肠杆菌（Enterobacter sp.）ECU 1107，其保藏编号为CGMCC No.5981。

2.一种分离的蛋白质，其特征在于：其是如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)其氨基酸序列如序列表中SEQ ID No:2所示的蛋白质；

(b)在(a)中的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸残基且具有酯酶活性的由(a)衍生的蛋白质。

3.一种分离的核酸，其特征在于，其是如下(1)或(2)的核酸：

(1)其核苷酸序列如序列表中SEQ ID No:1所示的核酸；

(2)编码如下蛋白质(a)或(b)的基因：

(a)其氨基酸序列如序列表中SEQ ID No:2所示的蛋白质；

(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有酯酶活性的由(a)衍生的蛋白质。

4.一种包含如权利要求3所述的核酸的重组表达载体。

5.一种包含如权利要求4所述的重组表达载体的重组表达转化体。

6.一种重组酯酶的制备方法，其特征在于，该制备方法包括：培养如权利要求5所述的重组表达转化体，从培养物中获得重组表达的酯酶。

7.一种酯酶的制备方法，其特征在于，其方法包括以下步骤：

(1)培养权利如要求1所述的肠杆菌，将其培养混合物离心后获得肠杆菌整细胞；或

(2)将步骤(1)所得肠杆菌整细胞破碎后制备成酯酶粗酶液；或

(3)将步骤(2)所得酯酶粗酶液冷冻干燥后制备成酯酶粗酶粉。

8.如权利要求1所述的肠杆菌，或如权利要求2所述的蛋白质，或如权利要求5所述的重组表达转化体在制备(2S,3R)-苯基缩水甘油酸甲酯中的用途。

9.一种(2S，3R)-苯基缩水甘油酸甲酯的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：在不溶于水的有机溶剂和水相缓冲液构成的两相体系中，在权利要求1所述的肠杆菌，或权利要求2所述的蛋白质，或如权利要求5所述的重组表达转化体的催化下，消旋底物(±)-苯基缩水甘油酸甲酯进行水解拆分反应，形成(2S,3R)-苯基缩水甘油酸甲酯。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述不溶于水的有机溶剂和水相缓冲液构成的两相体系中，不溶于水的有机溶剂为甲苯、异丙醚、正己烷、环己烷或异辛烷，不溶于水的有机溶剂-水两相的体积比为1︰9～2︰1，所述水解拆分反应在20～50℃进行2～48小时，反应体系pH 5～8。