[发明专利]表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组猪痘病毒载体疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物制品领域，本发明涉及一种表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组猪痘病毒载体疫苗，该疫苗专用于加强猪对PCV2的免疫保护，减少养猪业的经济损失。

背景技术

猪圆环病毒2型（PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（Post-weaning Multisystemic Wasting Syndrome, PMWS）的主要病原，还与猪皮炎与肾病综合征（Porcine Dermatitis and Nephropathy Syndrome, PDNS）等疾病密切相关。Cap是PCV2的主要结构蛋白，具有良好的抗原性，能刺激机体产生特异性抗体，与PCV2致病性和机体的免疫保护作用密切相关，一直是研制PCV2疫苗的焦点。现有技术中已有多种用PCV2的Cap蛋白的编码基因为目的基因构建的用于防治猪圆环病毒的疫苗，其中所用载体各不相同，例如原核质粒、杆状病毒等。但是未见使用痘病毒载体报道，更未见使用猪痘病毒载体构建用于防治PCV2的疫苗的报道。

重组痘病毒载体疫苗已经有近30年的安全应用，作为表达载体，痘病毒有许多特有的优点：(1)冻干疫苗较稳定、费用低、容易进行生产和使用；(2)疫苗有多种用药途径，包括口服，尤其是针对野生动物进行免疫预防时，给药特别方便；(3)接种一次就能获得长期的免疫效果，能诱导抗外来抗原的抗体和细胞毒性T细胞反应；(4)基因组容易组装，允许大片段的基因丢失或删除，以及外源DNA的插入。 

应用重组痘病毒已经成功地表达了来源于动植物，乃至人类的许多种基因。被表达的外源蛋白在感染细胞中能忠实地进行修饰，与其它哺乳动物病毒表达载体相比，具有较高的表达效率。通过对动物接种重组痘病毒的办法，能了解外源蛋白对个体的作用以及机体的免疫应答。表达抗原基因的重组痘病毒，可作为基因重组疫苗。痘病毒作为基因重组活疫苗的载体，不需佐剂即可免疫动物，病毒在体内增殖过程中产生的外源蛋白可刺激机体产生免疫应答，不仅诱导机体产生体液免疫，而且诱导很强的细胞免疫。目前常用表达载体的痘病毒主要有：痘苗病毒、禽痘病毒等。猪痘病毒载体构建疫苗乃本发明人独创。 

本发明人经过大量实验成功构建了表达Cap的重组猪痘病毒载体疫苗，由于猪痘病毒为猪源病毒，能在免疫猪体内进行有效的增殖，因而以其为载体构建的疫苗相对于其他载体疫苗取得了更好的免疫效果。 

发明内容

本发明的目的是研制一种能够有效控制猪圆环病毒的重组猪痘病毒载体疫苗，对猪圆环病毒病的防治工作提供有力的支持。

一方面，本发明提供了一种猪圆环病毒2型的Cap蛋白的编码基因，其具有如SEQ ID NO: 3所示的核苷酸序列。 

另一方面，本发明提供了一种重组猪痘病毒(rSPV-cap)，该重组猪痘病毒是在猪痘病毒载体中插入本发明所述cap基因重组制备得到的。 

在优选的实施方案中，本发明所述cap基因具有如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。 

本发明通过动物免疫试验发现：本发明提供的重组猪痘病毒能够在免疫动物体内大量增殖，表达目的蛋白Cap，能够诱导动物体内产生较高效价的抗体,并对免疫动物产生良好的保护作用。 

因此，另一方面，本发明提供了一种疫苗，其中含有本发明所述的重组猪痘病毒和一种或多种药物学上可接受的载体或佐剂。该重组猪痘病毒包含猪痘病毒载体和本发明所述的cap基因。 

在一个优选实施方案中,所述的cap基因具有如SEQ ID NO: 3所示的核苷酸序列。 

在一个优选实施方案中,所述的猪痘病毒载体为VR-363。 

另一方面，本发明提供了本发明所述的重组猪痘病毒及含有其的疫苗组合物在制备预防和/或治疗猪圆环病毒引发的疾病的药物中的用途，优选用于制备预防和/或治疗猪圆环病毒2型引发的疾病的药物中的用途。 

本发明中所述的猪圆环病毒2型引发疾病包括断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎与肾病综合征（ PDNS）等疾病。 

本发明所述的重组猪痘病毒及含有其的疫苗组合物的免疫接种途径包括但不限于肌肉注射等。 

另一方面，本发明提供了一种制备重组猪痘病毒的方法，该方法包括： 

（1）利用基因工程方法构建通用穿梭载体pUSG11/P28；

（2）利用特异性引物对扩增猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白的编码基因cap；