[发明专利]用于基因传递的具有增强内吞作用的表面的全氟化碳纳米乳液

说明书

本申请是申请日为2009年5月13日，发明名称为“用于基因传递的具有增强内吞作用的表面的全氟化碳纳米乳液”的中国专利申请第200980118149.7号的分案申请。 

技术领域

本发明在于提供稳定的适合用于基因传递的全氟化碳纳米乳液、其制备和应用。 

背景技术

常规的寡核苷酸和近年来的短干扰RNA是有希望用于基因传递的并被广泛使用的物质。至今，将该遗传物质应用于活体动物的可能性是非常有限的。 

对于遗传物质的递送，全氟化碳(PFC)乳液成功地用作氧转运体，因此这些乳液是一种有前途的工具(Daugherty,W.P.,等,Neurosurgery54:1223-1230(2004);Riess,J.G.,Artif.Cells Blood Substit.Immobil.Biotechnol.33:47-63(2005))。在气管内应用后，常规的全氟化碳乳液可以将药物运输至肺(Dickson,E.W.等,Acad.Emerg.Med.10:1019-1023(2003))。此外，PFC乳液具有通过呼气安全清除的优势(Putyatina,T.K.等,Artif.Cells Blood Substit.Immobil.Biotechnol.22:1281-1285(1994))。 

因此，全氟化碳可以作为用于将遗传物质递送至活体动物的有效和安全的工具而发挥作用。由于其作为氧转运体的功能，常规的PFC-乳液具有的尺寸阻止其离开血管床并且因此上述乳液将不能够将物质转运至活生物体的细胞中。 

过去几年中，已经提出了几种不太有效的转运系统，例如，结合胆固醇或由载脂蛋白A介导至肝内的转运体(Kim,S.I.等，A-I.Mol.Ther.15:1145-1152(2007))。 

EP-B-0788347公开了平均直径为至多10nm的含有水滴的油包水 氟碳化合物乳液的制备。将氟化的表面活性剂或含有至少一种氟化的表面活性剂的表面活性剂混合物用作乳化剂。 

EP-A-1844772公开了一种用于以寡核苷酸转染细胞的组合物，其中乳化剂是具有C₁₀-C₃₆烃或氟碳链的咪唑鎓衍生物。 

EP-B-00831770公开了含有携带药物活性化合物的不连续相的氟化化合物的连续微分散体。US 2004/0115159公开了一种水包油纳米乳液，其由表面活性物质的三元体系组成，适合作为用于化妆品和药剂的转运剂。此三元体系含有阴离子、阳离子和两亲性表面活性剂。 

US 7211248公开了用DNA转染肝细胞的方法，其中超声造影剂补充以带有质粒DNA的蛋白稳定微粒。转染通过肝细胞的超声作用来实现。 

US 2007/0184076公开了一种纳米液滴混合物，其由氟碳化合物和例如抗癌剂的治疗活性物质的生物学可接受的油混合物组成。 

US 2006/0013820公开了一种组合物，其含有多种氟碳化合物、适合作为治疗剂的抗原和任选地含有其他的药物载体。该组合物据说适合作为疫苗，尤其用于治疗HIV。 

WO 96/40057、WO 96/40053和EP-A-1306083公开了作为治疗活性物质的载体的稳定的全氟化碳(纳米)乳液。 

US 6071890公开了在体内负载DNA和RNA的转运体和还负载生物学活性化合物的两亲性阳离子物质。这些物质与类固醇结合。 

WO 01/722812公开了一种作为转染剂的微粒，其含有聚合物质、生物学活性治疗因子和脂蛋白。 

仍然需要用于在生物体中基因传递的可靠的转运载体。 

发明的概述 

目前发现具有增强内吞作用的表面的全氟化碳纳米乳液、特别是含有作为乳化剂的磷脂的具有增强内吞作用的表面的全氟化碳纳米乳液，适合于在体内施用遗传物质。添加为纳米乳液提供增强内吞作用的表面的分子，显著地增加细胞对全氟化碳纳米乳液的摄取。因此，本发明在于提供 

(1)一种稳定的具有增强内吞作用的表面的全氟化碳纳米乳液； 

(2)上述(1)的优选实施方式，其中上述纳米乳液具有连续的全氟化碳相和缓冲的不连续水相，并且含有 

(a)全氟化碳组分，其含有至少一种全氟化碳化合物； 

(b)乳化组分；和 

(c)增强内吞作用的组分，其含有至少一种通过内吞作用诱导细胞摄取上述纳米乳液的化合物；