[发明专利]一种荷茗草醌的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于天然物质的提取技术领域，涉及一种荷茗草醌的提取方法。

背景技术

荷茗草醌是从唇形科(Labiatae)荷茗草Horminum pyrenaicum中分离得到的一种二萜类化合物，分子式为C₁₅H₂₀O₂，分子量为332.44。研究发现荷茗草醌具有：1.抗菌活性，对金黄色葡萄球菌和霍乱弧菌的MIC都为7.8μg/ml，对白色念珠菌和绿脓杆菌的MIC都为250μg/ml；2.细胞毒活性，抑制小鼠淋巴细胞白血病P388细胞的ED₅₀为4.6μg/ml，对HeLa细胞的IC₅₀为13.5μg/ml，对Hep-2细胞的IC₅₀为15.8μg/ml；3.抗锥虫活性，体外在30μM浓度时能完全抑制克氏锥虫(T.cruzi)的生长；4.蛙背神经节试验表明，本品抑制神经元GABA受体控制的氯离子流(chloridecurrent)，且呈浓度依赖关系。

经文献检索，国内尚未发现荷茗草醌的工业提取方法相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效、环保的荷茗草醌的提取方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

1）以荷茗草为原料，加入萃取釜中，以80-85%乙醇溶液为夹带剂，以超临界CO₂为溶剂进行萃取，收集萃取物；

2）将萃取物用体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶液为萃取剂进行逆流萃取，收集合并萃取液，减压回收溶剂得浓缩液；

3）将浓缩液用高速逆流色谱分离纯化，以正己烷-氯仿-正丙醇-水两相溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，根据谱图收集成分，低温浓缩干燥即得荷茗草醌。

所述步骤1）中超临界CO₂萃取条件为：萃取温度为35-50℃，萃取压力为20-28MPa，分离釜Ⅰ温度为28-35℃，压力为6-8MPa，分离釜Ⅱ温度为25-30℃，压力为5-6.5MPa。

所述步骤3）中正己烷-氯仿-正丙醇-水体积比为（15-17）：（10-13）：（13-16）：（5-8）。

本发明的有益效果是：采用超临界CO₂萃取，低耗能、环保，采用高速逆流色谱分离荷茗草醌，分离过程无产品损失，高效，制备周期短。

具体实施方式：

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

实施例1：

取荷茗草药材1000g，加入超临界CO₂萃取釜中，开启设备，设置参数：萃取温度为50℃，萃取压力为25MPa，分离釜Ⅰ温度为35℃，压力为8MPa，分离釜Ⅱ温度为30℃，压力为5MPa，CO₂流量为18L/h，以80%的乙醇溶液为夹带剂，萃取时间1.5h，得到萃取物，将萃取物加入萃取塔顶，用体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶液为萃取剂进行逆流萃取，按与料液流量比2:1从萃取塔底部加入，使两相混合完成萃取，收集顶部萃有荷茗草醌的萃取液，减压回收萃取剂得浓缩液。取正己烷、氯仿、正丙醇、水按15:10:13:5比例混合，静置分层，取上相泵入色谱管，开启高速逆流色谱仪，调整转速为850rpm，同时把下相以3ml/min流速泵入，注入二浓缩液，紫外检测器监测，收集流分，减压浓缩后，干燥即得荷茗草醌，含量96.7%，收率81.3%。

实施例2：

取荷茗草药材1000g，加入超临界CO₂萃取釜中，开启设备，设置参数：萃取温度为35℃，萃取压力为25MPa，分离釜Ⅰ温度为30℃，压力为7MPa，分离釜Ⅱ温度为25℃，压力为6MPa，CO₂流量为20L/h，以85%的乙醇溶液为夹带剂，萃取时间2h，得到萃取物，将萃取物加入萃取塔顶，用体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶液为萃取剂进行逆流萃取，按与料液流量比2:1从萃取塔底部加入，使两相混合完成萃取，收集顶部萃有荷茗草醌的萃取液，减压回收萃取剂得浓缩液。取正己烷、氯仿、正丙醇、水按17:13:16:8比例混合，静置分层，取上相泵入色谱管，开启高速逆流色谱仪，调整转速为850rpm，同时把下相以3ml/min流速泵入，注入浓缩液，紫外检测器监测，收集流分，减压浓缩后，干燥即得荷茗草醌，含量97.3%，收率84.5%。

实施例3：