[发明专利]碱性蛋白酶法从肠粘膜提取肝素钠的工艺

权利要求书

1. 一种碱性蛋白酶法从肠粘膜提取肝素钠的工艺，其特征在于：所述的工艺步骤如下：

（1）酶解：将猪小肠粘膜浆液加入酶解罐，猪小肠粘膜浆液为猪小肠粘膜：水=1: 2.5-4的重量比的混合物，向酶解罐中加入盐度21°-24°的氯化钠溶液调节酶解罐中料液的盐度至5±0.5°，控制料液的pH在8.5±0.5；接着按每1000L料液加1.2±0.4kg的酶量向酶解罐内加入2709碱性蛋白酶，控制料液温度在53±3℃，盐度4.2±0.2°，pH 7.0±0.5保持3±0.5小时；最后升温至85-88℃，保持20-25min得酶解液，过滤去残渣；

（2）吸附：将酶解液输入吸附罐，降温至57±3℃，加水调节盐度至3.0±0.5°，控制pH 7.0-7.5，按每1000L酶解液加3-8kg的树脂量，向吸附罐内加入罗门哈斯FPA98CL型树脂，搅拌吸附6-8小时后，收集树脂；

（3）洗涤：将收集的树脂用水洗涤至pH为中性，再将树脂放入盐度4±1°、温度55-60℃的氯化钠溶液，搅拌至少1小时进行洗涤，其中，树脂：氯化钠溶液=1:1.3-1.7（w/v）；

（4）洗脱：将步骤（3）洗涤后的树脂倒入洗脱罐中进行两次洗脱，其中，第一次洗脱为：将树脂加入到盐度为21±1°、温度55-60℃的氯化钠溶液中搅拌至少3小时，树脂：氯化钠溶液=1:1-1.4（w/v）；第二次洗脱为：将第一次洗脱后的树脂加入到盐度为21±1°、温度55-60℃的氯化钠溶液中搅拌至少3小时，树脂：氯化钠溶液=1:0.8-1.2（w/v）；合并两次收集的洗脱液；

（5）沉淀：将步骤（4）收集到的洗脱液倒入沉淀罐中，搅拌条件下向沉淀罐中加入酒精度85±5°的酒精，酒精用量以实测沉淀罐中混合液的酒精度到45°-60°为准，静置沉淀15小时以上，收集沉淀物；

（6）干燥：步骤（5）收集的沉淀物加入酒精度85°以上的酒精进行脱水1-3小时，滤干后做烘干处理即得肝素钠产品。

2.根据权利要求1所述的碱性蛋白酶法从肠粘膜提取肝素钠的工艺，其特征在于：步骤（1）处理得到的酶解液在6000-8000转/分的转速下，离心处理20-40min后，再进入下一步的吸附。

3.根据权利要求1所述的碱性蛋白酶法从肠粘膜提取肝素钠的工艺，其特征在于：将步骤（2）收集树脂后剩余的料液重新输送至吸附罐，控制温度在57±3℃，pH 7.0-7.5，按每1000L料液加2-3kg的树脂量向吸附罐内加入罗门哈斯FPA98CL型树脂再次吸附6-8小时后，收集树脂，然后与步骤（2）收集的树脂合并后，进入下一步的洗涤步骤。

4.根据权利要求1或3所述的碱性蛋白酶法从肠粘膜提取肝素钠的工艺，其特征在于：所述罗门哈斯FPA98CL型树脂活化处理后再使用，活化处理为：树脂用50-60℃温水浸泡20小时以上后用清水冲洗干净并沥干，再加入质量浓度为10%的氢氧化钠溶液搅拌1个小时以上，最后用清水冲洗至洗液pH为中性，所述氢氧化钠溶液的加入量为每千克树脂加入1L氢氧化钠溶液的量计；活化后的树脂在4000-5000转/分的转速下，离心处理10-30min，再用于吸附。

5.根据权利要求1或2或3所述的碱性蛋白酶法从肠粘膜提取肝素钠的工艺，其特征在于：步骤（4）收集的洗脱液进入超滤机超滤后再进入步骤（5）沉淀，超滤机的超滤膜孔径在0.45μm-0.6μm。

6.根据权利要求1或2或3所述的碱性蛋白酶法从肠粘膜提取肝素钠的工艺，其特征在于：步骤（4）收集的洗脱液在8000-10000转/分的转速下，离心处理10-20min后，再进入步骤（5）沉淀。

7.根据权利要求1或2或3所述的碱性蛋白酶法从肠粘膜提取肝素钠的工艺，其特征在于：步骤（5）收集沉淀物后剩余的上清液输入另一空沉淀罐中，向另一空沉淀罐中加入饱和氯化钠溶液搅拌均匀，并调节pH为9-10，上清液与饱和氯化钠溶液的体积比为1：0.5-0.7，静置沉淀8-12小时后，收集沉淀，然后与步骤（5）收集的沉淀物合并后进入下一步的干燥。

8.根据权利要求1或2或3所述的碱性蛋白酶法从肠粘膜提取肝素钠的工艺，其特征在于：步骤（6）烘干处理的温度为60-80℃。

9.根据权利要求1或2或3所述的碱性蛋白酶法从肠粘膜提取肝素钠的工艺，其特征在于：收集步骤（1）酶解液过滤获得的残渣，向酶解罐中加入盐度5±0.5°的氯化钠溶液，然后将残渣重新加入酶解罐中，残渣与盐度5±0.5°的氯化钠溶液的重量比为1:5-6，控制料液的pH在8.5±0.5，接着按每1000L料液加1.0-1.2kg的酶量向酶解罐内加入2709碱性蛋白酶，控制料液温度在55±1℃，保温6-7小时；最后升温至88-90℃，保持20-25min，再静置20-30min后得酶解液，酶解液在6000-8000转/分的转速下，离心处理20-40min后，进入下一步的吸附。