[发明专利]枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物的提取分离方法及应用，特别是一种从枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法及其应用。 

技术背景

α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)是一类能够从含有α-葡萄糖苷键底物的非还原端催化水解α-葡萄糖基的酶的总称，其广泛分布于生物体中，参与食物消化、糖蛋白的生物合成，多糖及糖复合物的合成与分解代谢等许多生物代谢过程。抑制α-葡萄糖苷酶的活性可调节细胞表面的复合糖质，而糖尿病、肥胖症、高血脂、炎症、癌变、免疫反应和病毒感染等都和细胞表面的复合糖质有密切关系，因此，开发出适当的α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物，可以治疗很多疾病。 

枸杞(Lycium)是我国传统的中草药，首载于《神农本草经》，之后历代本草对其都有详尽的记载。果实入药称枸杞子，味甘，性平。有滋补肝肾，益精明目功效。主治肝肾阴虚、头晕目眩、腰膝酸痛等证。现代免疫学和临床医学多项试验表明枸杞果实及枸杞多糖可有效提高机体免疫调节功能，治疗糖尿病及其并发症，具有抗突变、抗肿瘤、抗疲劳、延缓衰老、明目养颜保肝降血糖等功效。而对枸杞籽的研究不多，一般主要用于提取具有医疗保健作用的枸杞油，提取后的残渣则视为废物，但枸杞籽和果是包含在一起的，且籽约占干果的四分之一重量，为了开发利用枸杞籽及其提取枸杞油后废弃的残渣，我们对其进行了化学成分及生物活性的研究。 

发明内容

本发明的目的是提供一种从枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的制备方法及其应用。 

本发明的目的按照下述方案实现： 

从枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法，其步骤为：枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣经甲醇超声提取3次，合并提取 液，减压干燥得甲醇总提取物，将甲醇总提取物加水溶解后，分别用等体积的正己烷、乙酸乙酯萃取3次，减压回收溶剂，得正己烷提取物、乙酸乙酯提取物；剩下的水层经大孔树脂柱处理，甲醇洗脱，得甲醇洗脱物、水洗脱物，采取α-葡萄糖苷酶活性体系追踪，发现正己烷提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇洗脱物均表现出一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性，将上述三种提取物经硅胶柱色谱，ODS柱色谱以及高效液相制备色谱分离得到14个化合物，结构和名称见附图1。 

所述抑制剂的用途，是将其用作临床治疗II型糖尿病治疗的首选药和I型糖尿病的胰岛素治疗的辅助药物； 

所述抑制剂的用途，是将其用作预防艾滋病的辅助药物； 

所述抑制剂的用途，是将其用作阻止肿瘤血管生长的抗肿瘤药物。 

α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定 

本发明以4-硝基酚-2-D-吡喃葡萄糖苷(缩写PNPG)为反应底物，具体的反应体系为25μL PNPG，加入25μL各种浓度的样品溶液后，加入25μL α-葡萄糖苷酶，再加入175μL磷酸盐缓冲液，在混合器上混合10分钟后。在37℃反应15分钟，加入1M Na₂CO₃ 50μL终止反应，在405nm波长处测定吸收值。通过不加样品测定样品空白，不加α-葡萄糖苷酶测定阴性对照。样品的抑制率通过以下公式计算：抑制率(％)=(OD_{Negative control}-OD_Blank)-(OD_Sample-OD_{Sample blank})/(OD_{Negative control}-OD_Blank) 

附图说明

附图1是本发明从枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣中提取得到的14个化合物的名称及结构示意图。 

附图2是本发明枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣提取工艺流程图，图中，LB代表枸杞；M为甲醇；N为乙腈；T为0.06％三氟乙酸；HAc为3％的醋酸；例如：12％NT是12％的乙腈溶液(包含0.06％三氟乙酸)；IC50为半数致死率；HPLC为制备高效液相色谱法。 

单体化合物的IC50(半数致死率)单位：Mm 

具体实施方式：

下面通过具体实施例对本发明进行描述。但本发明的范围并不仅限于此。 

1、提取与分离